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伊势久 脯氨酸含量检测试剂盒分光光度50T/48S 分光光度100T/96S 微量法50T/48S微量法100T/96S

价格 650/盒
起订量 ≥1
所在地 上海 上海 可售量 10000盒

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基本参数

纯度 / 规格 50T/48S
品牌 伊势久 产品名称 "脯氨酸含量检测试剂盒(分光光度50T/48S)/t"
名称 "脯氨酸含量检测试剂盒(分光光度50T/48S)/t" 货号 SR015
包装类型 测定原理 用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色
用途范围 生化研究 类别 生化试剂盒


脯氨酸(PRO)含量测定试剂盒说明书

分光光度法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

Pro广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

测定原理:

用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在520nm测定吸光度。

组成:

产品名称

SR015-50T/48S

SR015-100T/96S

Storage

提取液:液体

50ml

100ml

4℃

试剂一:冰乙酸(自备)

25ml

50ml

4℃

试剂二:液体

25ml

50ml

4℃

试剂三:甲苯(自备)

50ml

100ml

4℃

说明书

一份

自备仪器和用品:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、冰乙酸50ml、甲苯50ml、研钵、冰和蒸馏水。

样品测定的准备:

1、细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);之后置95℃水浴振荡提取10min10000g25℃离心10min,取上清,冷却后待测。

组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行匀浆;之后置95℃水浴振荡提取10min10000g25℃离心10min,取上清,冷却后待测。

2、血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(ml):提取液体积(ml)15~10的比例(建议取0.1ml血清(浆)加入1ml提取液),充分混匀,之后置95℃水浴振荡提取10分钟,10000g25℃离心10分钟,取上清,冷却后待测。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。

2、样本测定:

(1)0.5ml样本 0.5ml试剂一 0.5ml试剂二 于有盖试管中,置95℃水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。

(2)待冷却后,在试管中加入1ml试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取0.8ml-1ml上层溶液于1ml玻璃比色皿中,于520nm波长处比色,记录吸光值A

Pro含量计算:

1、典型回归方程y = 0.0521x - 0.0021 (x为脯氨酸含量,μg/mly为吸光值A)

2、按照血清(浆)体积计算

Pro含量(μg/ml)=[(A 0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V3×V1÷V2=192×(A 0.0021)

3、按照蛋白浓度计算

Pro含量(μg/mg prot)=[(A 0.0021) ÷0.0521×V1]÷(V1×Cpr)=19.2×(A 0.0021)÷Cpr

4、按照样本质量计算

Pro含量(μg/g鲜重)= [(A 0.0021) ÷0.0521×V1]÷(W×V1÷V2)=19.2×(A 0.0021)÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

Pro含量(μg/104cell)=[(A 0.0021) ÷0.0521×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0384×(A 0.0021)

V1:加入反应体系中样本体积,0.5mlV2:加入提取液体积,1 mlV3:加入血清(浆)体积,0.1 mlCpr:样本蛋白质浓度,mg/mlW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500万。

注意:检测限为1μg/ml1μg /g鲜重 0.01μg /mg prot

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