伊势久生物 过氧化氢（H2O2）检测试剂盒（微量法50T/48S） 微量法100T/96S 科研专用
| 价格 | ￥200/盒 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000盒 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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主营产品： 实验试剂,
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基本参数
| 纯度 | / | 规格 | 50T/48S |
| 品牌 | 伊势久 | 产品名称 | 生化试剂＂过氧化氢（H2O2）检测试剂盒（微量法50T/48S）/t＂ |
| 名称 | 生化试剂＂过氧化氢（H2O2）检测试剂盒（微量法50T/48S）/t＂ | 货号 | OX002 |
| 包装类型 | 盒 | 测定原理 | H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收 |
| 用途范围 | 生化研究 | 类别 | 生化试剂盒 |
过氧化氢含量（H2O2）试剂盒说明书
微量法 100管/96样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
H2O2是生物体内最常见的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化产生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不仅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互转化的枢纽。一方面，H2O2可以直接或间接地氧化细胞内核酸，蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体；另一方面H2O2也是许多氧化应急反应中的关键调节因子。
测定原理：
H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。
试剂的组成和配制：
产品名称 |
OX002-100T/96S |
Storage |
试剂一：丙酮 |
100ml（自备） |
4℃ |
试剂二：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
试剂三：液体 |
10ml |
4℃ |
试剂四：液体 |
30ml |
4℃ |
说明书 |
一份 |
|
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3ml浓盐酸充分溶解备用。用不完的试剂4℃保存；(溶解时间较长，约30min，可40℃-60℃加热，务必提前准备)
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮100ml、浓盐酸5ml、研钵和冰。
H2O2提取：
1、或细胞样品的制备：收集或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照或细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万或细胞加入1ml试剂一），超声波破碎或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；用试剂一定容至1ml；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样品的制备：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆；转移至EP管中，用试剂一定容至1ml，8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至415nm，蒸馏水调零。
2、将试剂二、三和四37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。
3、在EP管中按顺序加入下列试剂。
试剂名称（μl） |
测定 |
对照 |
样本 |
250 |
|
试剂一 |
250 |
|
试剂二 |
25 |
25 |
试剂三 |
50 |
50 |
充分混匀，静置5min后，20000g，25℃离心5min，弃上清，沉淀中加入：
试剂四 |
1000 |
1000 |
加入试剂四溶解沉淀后，室温静置5min，取200μL转移至微量石英比色皿或96孔板中测定415nm处吸光值A。对照管只要做一次即可。计算ΔA＝A测定-A对照。
注意事项
1、由于试剂一易挥发，试剂一必须先预冷再加，研磨时必须在冰上研磨。
2、本试剂盒中试剂的挥发性较高，请带一次性手套和口罩。
H2O2含量计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归曲线，y = 0.7488x 0.0006 (x为标准品浓度，μmol/ml；y为ΔA)。
2、血清（浆）中H2O2含量的计算：
H2O2含量（μmol/ml）＝(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)
3、、细胞或动物组织中H2O2含量计算
（1）按照蛋白浓度计算
H2O2含量(μmol/mg prot)=[(ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按照样本质量计算
H2O2含量(μmol/g鲜重)=[(ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W
(3)按照或细胞密度计算：
H2O2含量(μmol/104)=[(ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)
V1：加入反应体系中样本体积，0.25ml；V2：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定的回归曲线，y = 0.3744x 0.0006 (x为标准品浓度，μmol/ml；y为ΔA)。
2、血清（浆）中H2O2含量的计算：
H2O2含量（μmol/ml）＝(ΔA-0.0006)÷0.3744=2.67×(ΔA-0.0006)
3、、细胞或组织中H2O2含量计算
（1）按照蛋白浓度计算
H2O2含量(μmol/mg prot)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(V1×Cpr)=2.67×(ΔA-0.0006) ÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按照样本质量计算
H2O2含量(μmol/g鲜重)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(W ×V1÷V2)= 2.67×(ΔA-0.0006) ÷W
(3)按照或细胞密度计算：
H2O2含量(μmol/104)=[(ΔA-0.0006) ÷0.3744×V1]÷(500×V1÷V2)= 0.0054×(ΔA-0.0006)
V1：加入反应体系中样本体积，0.25ml；V2：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或总数，500万。
注意：标曲线性范围为0.1μmol/ml-2μmol/ml，吸光度ΔA线性范围为0.03-1，若ΔA超过1则需要稀释，计算公式乘以相应稀释倍数。
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