转基因元件Pssu-Ara启动子探针法qPCR试剂盒50次

服务流程：

1、根据客户提供的基因序列设计特异性引物和荧光探针（染料法只需设计引物）

2、抽提DNA、RNA，并对RNA进行逆转录

3、实时荧光定量PCR

4、提供完整的实验结果报告(检测数据、溶解曲线、扩增曲线)

5、返还样品（引物、RNA和cDNA）

产品特点：

是基于 T7 RNA 聚合酶的 RNA 体外转录试剂盒，它利用含有 T7

启动子的模版 DNA，以 NTP 为底物，从 T7 启动子下游开始合成与模版 DNA

中一条链互补的 RNA，简单快速获得大量的 RNA 分子。

本产品具有下列特点：产品仅用于科研

1. 即开即用，用户只需提供含T7 启动子的DNA 模板即可以进行体外转录实验，

不需要单独准备每一个成份。

2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。

3. 模版 DNA 可以是线性化的质粒 DNA，也可以是 PCR 扩增产物。

4. 可以合成的 RNA 的*佳长度在 20nt 到 2000 nt 之间。

5. 产品配方经过精心优化，每 ug DNA 模版可以合成 2-6 ug RNA。

6. 得到的 RNA 可以用于 RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋

白质相互作用、反义技术、SELEX 技术和 RNA 干扰（RNAi）等实验。

7. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的体外转录实验。 规格及成分 成份 编号 十孔盒包装

T7 转录预配液（2×） 91106a 0.5 mL

阳性对照 DNA（1.3 Kb 片段） 91106b

20 uL

（10 ng/uL）

T7 RNA 聚合酶 91106c 50 uL

RNase-free 水 80403 1 mL

使用手册 91106sc 1 份

PCR检测方法包括以下步骤：

(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。

步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。

CL-0241VCaP(人前列腺癌细胞)5×106cells/瓶×2草酸锂(>98%,BR)Lithium oxalate质量规格：>98%,BR

HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系 昆虫卵巢细胞，SF9细胞 NK-92(人恶性非霍奇金瘤患者的自然杀伤细胞)硬脂酸锂(>98%,BR)Lithium stearate质量规格：>98%,BR

人导管癌细胞;ZR-75-303,5-二-L-酪氨酸3,5-Diiodo-L-tyrosine dihydrate质量规格：>98%,BR

CHIT1 Others Human 人 CHIT1 / Chitinase-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 氟氯西林钠(标准品)Flucloxacillin 质量规格：含量测定，标准品

恒河猴肾细胞;MMK2巴利森苷A；派立辛Parishin A质量规格：HPLC≥98%，标准品

NP Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/07/2009) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 硬脂酸钾(>98%,BR)质量规格：>98%,BRPotassium stearate

人胚胎肠粘膜组织来源细胞;CCC-HIE-21酸钾一水(>98%,BR)质量规格：>98%,BRPotassium tartrate, hydrate

大鼠雪旺细胞;RSC96 横纹肌瘤细胞，A-673细胞 SNL细胞，稳定转染了neor和LIF基因的STO细胞株亚碲酸钾(>98%,BR)质量规格：>98%,BRPotassium tellurite

lovo, 人结肠癌细胞 Human四草酸钾二水(>99%,BR)质量规格：>99%,BRPotassium tetraoxalate dehydrate

CD34 Others Mouse 小鼠 CD34 人细胞裂解液 (阳性对照) 骨抑制素，人质量规格：>95%,BROsteostatin (human)

BMP5 Others Human 人 BMP-5 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-(N-吗啉)磺酸钠，英文名或英文缩写：MOPS wo7ium salt，级别：BR，99%，规格：5克

EB病毒转化的人B细胞;KMYB三拂磺醋铜 COPPqR(II) TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 34946-8-

CD3D Others Human 人 CD3d / CD3 delta 人细胞裂解液 (阳性对照) NZ-AMINEA酶水解酪素细菌学级粉末COLD不sigma

C57BL/6小鼠神经

转基因元件Pssu-Ara启动子探针法qPCR试剂盒50次MHCC-97L人肝癌细胞(低转移) MHCC-97L human hepatoma cells (low metastasis) DMEM+10%FBS聚乙二醇8000250克RT

TNFSF11 Protein Human 重组人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白姆沙伯 P NAW ChroMosorb P NcW;

人结膜纤维原细胞(HConF)(5×105 ) HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞 Human聚乙二醇 3000 Poly(ethylene glycol) 3,000 (PEG 3000) 25322-68-3 250G 通用试剂

人导管癌细胞;ZR-75-30M-FC琼脂25毫升

ENPEP Others Rat 大鼠 ENPEP / Aminopeptidase A (aa 41-945) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (D-果糖-6-1酸二钠)

实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。