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葡萄糖氧化酶(GOD)测试盒

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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/48样100管/96样

葡萄糖氧化酶(glucose oxidaseGOD)试剂盒说明书

可见分光光度法

正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

GODEC 1.1.3.4)广泛存在于动物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并产生H2O2 ,是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

测定原理

GOD催化产生H2O2,过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质,颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

试验中所需的仪器和设备

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液:液体60mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体40mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体8mL×1 瓶,4℃保存;

试剂三:液体2mL×1 支,4℃保存;

样品测定的准备

组织处理:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

血清(浆):直接检测。

测定步骤

1、分光光度计预热 30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。

2GOD检测工作液的配制:用时将试剂二和试剂三转移至试剂一中,充分混匀,待用;用不完的试剂 4℃可保存一周;

3、测定前将 GOD 检测工作液在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴10min 以上。

4、在1mL玻璃比色皿中加入 40μL 样本和 960μL 工作液,立即混匀并计时,记录 500nm20s吸光值A11min20s 后的吸光值 A2。计算 ΔAA2-A1

GOD 活力单位的计算

1、血清(浆)GOD 活力的计算

单位定义:每 mL 血清(浆)每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GODnmol/min/mL=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=3333×ΔA

2、动物组织 GOD 活力的计算

1)按蛋白浓度计算

单位定义:每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GODnmol/min/mg prot=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr)÷T

=3333×ΔA÷Cpr

 

 

 

2)按样本鲜重计算

单位定义:每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。

GODnmol/min/ g鲜重)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T

=3333×ΔA÷W

V 反总:反应体系总体积,1×10-3 L;ε:氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数,7.5×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV 样:加入样本体积,0.04 mLV 样总:加入提取液体积,1 mLT:反应时间,1 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g

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