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羟自由基清除能力测定试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体5mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体3mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体3mL×1瓶,4℃保存。
产品说明:
羟自由基作用于体内蛋白质、核酸、脂类等生物分子,造成细胞结构和功能受损,进而导致体内代谢紊乱引起疾病。羟自由基清除能力是样品抗氧化能力的重要指标之一,在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H2O2/ Fe2+通过Fenton反应产生羟自由基,将邻二氮菲- Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+ ,导致536nm吸光度下降,样品对536nm吸光度下降速率的抑制程度,反映了样品清除羟自由基的能力。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
操作步骤:
一、样品的制备:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2. 血清、果汁等液体样品可直接测定。
3. 提取物(或者药物)可配制成一定浓度,如5mg/mL。
二、操作步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至536nm,蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管 |
对照管 |
测定管 |
|
试剂一(μL) |
30 |
30 |
30 |
试剂二(μL) |
80 |
80 |
80 |
试剂三(μL) |
20 |
20 |
20 |
立即混匀,防止局部颜色过浓 |
|||
样品(μL) |
50 |
||
试剂四(μL) |
20 |
20 |
|
H2O(μL) |
70 |
50 |
|
混匀37℃,60min,于微量石英比色皿/96孔板中测定536nm处吸光值,空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为A空、A对和A测。 |
注意:空白管和标准管只需测定一次。
计算公式:
羟自由基清除率 D% =(A测-A对)÷(A空-A对)×100%
A空、A对、A测:空白管、对照管和测定管的吸光值。
注意事项:
为了比较不同样品羟自由基清除能力,对于同一批样品必须加入等量的样品,血清、组织匀浆、果汁等液体样品加入同样体积,提取物(或者药物)配制成同样浓度。
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