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植物类黄酮(Flavonoid)试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
产品内容:
提取液:60%乙醇,自备。
试剂一:液体3mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体3mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。
产品说明:
类黄酮是一类多苯化合物,属于植物次生代谢物,对人体具有消炎,抗菌,降血脂,清除体内羟自由基,预防癌症等作用。
在碱性亚硝酸盐溶液中,类黄酮与铝离子形成在502nm处有特征吸收峰的红色络合物,测定样品提取液在502nm处的吸光值,即可计算样品类黄酮含量。
自备实验用品及仪器
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
操作步骤:
一、类黄酮提取
将样本烘干至恒重,粉碎,过40目筛之后,称取约0.1g,加入2.5mL提取液,用超声提取法进行提取,超声功率300W,破碎5s,间歇8s,60℃,提取30min。10000g,25℃,离心10min,取上清,用提取液定容至2.5mL,待测。
二、测定操作表
对照管 |
测定管 |
|
样本待测液(μL) |
200 |
200 |
试剂一(μL) |
50 |
50 |
混匀,25℃静置5min |
||
试剂二(μL) |
50 |
|
混匀,25℃静置5min |
||
试剂三(μL) |
400 |
400 |
60%乙醇(μL) |
350 |
300 |
混匀,25℃静置15 min,对照管调零,1mL玻璃比色皿,测定A502。 |
三、 类黄酮含量计算公式
标准曲线:y = 6.2096x+0.0008,R2 = 0.9996
类黄酮含量(mg/g)=(A502-0.0008)÷6.2096×V反总÷(V样÷V样总×W)= 2.013×A502÷W
V样总:加入提取液体积,2.5mL; V反总:反应总体积,1mL;V样:反应中样品体积,0.2mL;W:样品质量,g
注意事项:
1、 吸光值大于0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
2、 显色完成后立即测定,2小时后吸光值会下降。
3、 最低检出限为12.8μg/g。
。
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