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总巯基测试盒试剂盒

价格	￥200.00/盒	￥180.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/24样100管/48样

总巯基测定试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和 GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。

测定原理：

巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。

自备实验用品：

天平、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 15 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 1 mL×1 管，4℃避光保存。

样品的制备：

1. 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清，培养液：直接测定。

操作步骤：

1、分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 412nm，蒸馏水调零。

2、操作表

	对照管	测定管
样品（μL）	40	40
试剂一（μL）	150	150
试剂二（μL）		10
H₂O（μL）	10
混匀，25℃静置10min，于微量石英比色皿/96孔板，测定412nm吸光值。ΔA=A测定-A对照。

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

总巯基标准曲线：y = 1.7236 x，R²= 0.9994

1. 组织：

（1）按样本重量计算

总巯基含量（μmol/g）=ΔA÷1.7236×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）= 2.9×ΔA÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

总巯基含量（μmol/mg prot）=ΔA÷1.7236×V 反总÷(V 样×Cpr) = 2.9×ΔA÷Cpr

2. 血清、培养液：

总巯基含量（μmol/L）=ΔA÷1.7236×V 反总÷V 样×10 3 =2900×ΔA

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；10³：1mmol/L=10³μmol/ L

b.用96孔板测定的计算公式如下

总巯基标准曲线：y = 0.8618x，R²= 0.9994

1. 组织：

（1）按样本重量计算

总巯基含量（μmol/g）=ΔA÷0.8618×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）=5.8×ΔA÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

总巯基含量（μmol/mg prot）=ΔA÷0.8618×V 反总÷（V 样×Cpr）=5.8×ΔA÷Cpr

2. 血清、培养液：

总巯基含量（μmol/L）=ΔA÷0.8618×V 反总÷V 样×10³=5800×ΔA

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；V 样总：加入提取液体积，

1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；10³：1mmol/ L=10³μmol/ L

注意事项

最低检出限为 10μmol/L。

联系方式

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伍雅君

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公司地址：

上海市浦东新区港澳路271号1幢2层

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