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单宁含量试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定前取2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容:
试剂一:液体10 mL× 1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体8 mL × 1 瓶,4℃保存;
产品说明:
单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物,又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性,如能与蛋白质、生物碱、多糖结合;能与多种金属离子发生络合或静电作用;具有止血、抑制微生物、抗过敏、抗突变、抗肿瘤、抗衰老等生理活性。
单宁在碱性环境下与磷钼酸反应,生成蓝色化合物,在760nm 处有最大吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
操作步骤:
一、单宁的提取:
按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL蒸馏水),充分匀浆后转移到EP 管中,80℃水浴提取30min,8000 g,25℃离心10 min,取上清液待测。
二、测定步骤:
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至760nm,蒸馏水调零;试剂一和试剂二37℃预热10min以上。
2、 操作表:
试剂名称(μL) |
对照管 |
测定管 |
样本 |
15 |
|
蒸馏水 |
665 |
650 |
试剂一 |
175 |
175 |
混匀,室温静置5min |
||
试剂二 |
160 |
160 |
混匀,室温静置30min,760nm处读取吸光值A,ΔA=A 测定-A 对照,对照管只要做一管。
三、单宁含量计算:
1、 标准条件下测定的回归方程为y = 0.008x - 0.0021;x 为标准品浓度(μg/mL),y 为吸光值。
2、 按样本鲜重计算:
单宁含量(μg /g 鲜重)= [(ΔA+0.0021) ÷0.008×V1]÷(W×V1÷V2)=125×(ΔA+0.0021) ÷W。
3、 按样本蛋白浓度计算:
单宁含量(μg /mg prot)= [(ΔA+0.0021) ÷0.008×V1]÷(V1×Cpr)=125×(ΔA+0.0021) ÷Cpr。
V1:加入样本体积,0.015mL;V2:加入提取液体积,1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:最低检测限为10μg /g 鲜重 或0. 1μg /mg prot
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