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果胶含量试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
果胶是一种植物胶体,分布于果蔬类植物中,存在于植物的细胞壁和细胞内层。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,主要成分是半乳糖醛酸,其独特的物理、化
学性质影响着植物源食品的口感和品质。
测定原理:
采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应,生成紫红色化合物,在530 nm处有最大吸收峰。测定样品中半乳糖醛酸的含量,即可确定果胶的含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:标准液1mL×1支,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存;
样品的前处理:
按照样品质量(g)和蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比列(建议取约 0.1g 样品,加入1mL蒸馏水),充分匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清液待测。
测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至530nm处,蒸馏水调零;试剂一和试剂二37℃预热 10min以上;
2、操作表:
试剂名称(μL) |
空白管 |
标准管 |
对照管 |
测定管 |
待测样本 |
100 |
100 |
||
试剂一 |
100 |
|||
蒸馏水 |
100 |
100 |
||
试剂二 |
100 |
100 |
100 |
|
混匀 |
||||
浓硫酸 |
800 |
800 |
800 |
800 |
混匀 95℃水浴 5min 后,530nm 处读取吸光值,空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为 A1、A2、A3 和 A4。若A大于1,需将待测样本用蒸馏水稀释(可稀释10倍或20倍)。空白管和标准管只要做一管,每个测定管需设一个对照管。
果胶含量计算:
1、果胶含量(mg/mg prot)=(C 标准×V1)×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr) ×稀释倍数
=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷Cpr×稀释倍数。
2、果胶含量(mg /g 鲜重)= (C 标准×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀释倍数
=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数
C 标准:标准管浓度,0.05mg/mL;V1:加入样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1mL;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:最低检测限为 50μg/g 鲜重或 0.5μg/mg prot
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