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尿素氮(BUN)试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
尿素是生物体内含氮化合物分解的终产物,在尿酶催化下分解转化成氨。血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。
测定原理
在碱性条件下,尿酶水解尿素产生氨,氨与次氯酸反应生成氯胺,再与酚衍生物作用生成绿色吲哚酚,在 630nm 处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、研钵、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制
标准品:液体 1mL×1 支,4℃保存。
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃避光保存,临用前加 4mL 蒸馏水充分溶解。
试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
样品处理
1. 组织:按照质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,匀浆后于25℃,10000g 离心10min,取上清待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL蒸馏水),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后 4℃,10000g离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清或其它液体:直接检测。
测定操作
空白管 |
标准管 |
测定管 |
|
样品(μL) |
20 |
||
标准品(μL) |
20 |
||
H 2 O(μL) |
20 |
||
试剂一(μL) |
40 |
40 |
40 |
充分混匀,于 37℃反应 10min |
|||
试剂二(mL) |
70 |
70 |
70 |
试剂三(mL) |
70 |
70 |
70 |
充分混匀,于37℃显色10min,于微量石英比色皿/96孔板,双蒸水调零,测定630nm处吸光值,记为A空白管、A标准管和A测定管 |
注意:空白管和标准管只需测定一次。
计算公式
1. 按样本质量计算
尿素氮含量(mg/g)=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C 标准品÷W
= 0.005×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)÷W
2. 按细胞数量计算
尿素氮含量(mg/104cell)=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C标准品÷细胞数量= 0.005×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)÷细胞数量
3. 按液体体积计算
尿素氮含量(mg/L)=(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)×C 标准品
=5×(A测定管- A空白管) ÷(A标准管- A空白管)
C 标准品:标准品浓度,5mg/L;W:样品质量,g
注意事项
1. 配制好的试剂一在2-8℃条件下可保存一周。
2. 最低检出限为80μg/L。
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