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柠檬酸（CA）含量测试盒试剂盒

价格	￥690.00/盒	￥650.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/48样100管/96样

柠檬酸（citric acid, CA）含量测定试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环第一步反应的产物。

测定原理：

酸性条件下，柠檬酸还原Cr⁶⁺生成Cr³⁺，在 545nm 处有特征吸收峰；通过测定545nm吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体×2 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体×1 管，－20℃保存。

试剂四：粉剂×1 管，室温保存。临用前配制，加入2mL试剂一，充分溶解。

试剂五：液体×1 管，4℃避光保存。

标准品：液体×1 管，250μmol/L 柠檬酸标准液，4℃保存。

样品中柠檬酸提取：

1. 液体样品中柠檬酸提取：取0.1mL液体加试剂一0.9mL，充分混匀，11000g， 4℃离心10min，取上清液，待测。

2. 组织中柠檬酸提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。11000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

3. 线粒体中柠檬酸提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，600g/min，4℃离心5min；取上清至另一EP管中，11000g，4℃离心 10min，弃上清（此上清液可用于细胞质 CA含量测定）；向沉淀中加试剂二200μl，以及试剂三2μl，充分悬浮溶解，11000g，4℃离心10min，取上清液，待测。

4. 细菌、真菌中：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；11000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到545nm，蒸馏水调零。

2. 试剂一置于30℃水浴中预热 30min。

3. 空白管：取0.5mL EP管，依次加入20μL蒸馏水，140μL试剂一，20μL试剂四，20μL试剂五，混匀后室温静置30min，于545nm 测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取0.5 mL EP管，依次加入20μL标准液，140μL试剂一，20μL试剂四，20μL试剂五，混匀后室温静置30min，于545nm测定吸光度，记为A标准管。

5. 测定管：取0.5 mL EP管，依次加入20μL上清液，140μL试剂一，20μL试剂四，20μL

试剂五，充分混匀后室温静置30min，于545nm测定吸光度，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

计算公式：

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 按液体样品的体积计算