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丙酮酸(PA)测试盒

价格 580.00/盒 550.00/盒
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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/48样100管/96样

丙酮酸(pyruvic acid PA)含量测定试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

丙酮酸通过乙酰 CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。

测定原理:

丙酮酸与 2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈显色。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 2.5mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 12.5mL×1 瓶,4℃保存。

丙酮酸提取:

1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),静置30min8000g25℃离心 10min,取上清待测。

2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1m 提取液),进行冰浴匀浆,静置 30min8000g25℃离心 10min,取上清待测。

3、血清(浆)样品:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)15~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆,静置30min8000g25℃离心10min,  取 上清待测。

测定步骤:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。

2、在微量石英比色皿或96孔板中加入75μL样本和25μL试剂一,混匀,静置2min,加入125μL试剂二,混匀,于520nm 波长处测定管吸光值 A

丙酮酸含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0466x + 0.0675x 为丙酮酸钠含量(μg/mL),y 为吸光值。

2、按照血清(浆)体积计算

丙酮酸含量(μg/mL= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2=214.6×(A-0.0675)

3、按照蛋白浓度计算

丙酮酸含量(μg/mg prot=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)

=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照样品质量计算

丙酮酸含量(μg/g 鲜重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2

=21.46×(A-0.0675) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

丙酮酸含量(μg/104cell)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(500×V1÷V2

=0.043×(A-0.0675)

V1:加入反应体系中样本体积,0.075mLV2:加入提取液体积,1 mLV3:加入血清(浆)

体积,0.1 mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,

500 万。

b.96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0233x+0.0675x为丙酮酸钠含量(μg/mL),y 吸光值。

2、按照血清(浆)体积计算

丙酮酸含量(μg/mL= [(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(V3×V1÷V2=429.2×(A-0.0675)

3、按照蛋白浓度计算

丙酮酸含量(μg/mg prot=[(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(V1×Cpr)

=42.92×(A-0.0675) ÷Cpr

4、按照样品质量计算

丙酮酸含量(μg/g 鲜重)= [(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(W ×V1÷V2

=42.92×(A-0.0675) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

丙酮酸含量(μg/104cell)=[(A-0.0675)÷0.0233×V1]÷(500×V1÷V2

=0.086×(A-0.0675)

V1:加入反应体系中样本体积,0.075mLV2:加入提取液体积,1 mLV3:加入血清(浆)体积,0.1 mLCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g500:细菌或细胞总数,500 万。

注意:最低检测限为 100μg/mL 100μg/g 鲜重或 1μg/mg prot

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