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果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FDA)测试盒 试剂盒

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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检查试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/48样100管/96样

果糖 1,6- 二磷酸醛缩酶

Fructose 1,6 bisphosphate aldolase,FDA)试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果糖 1,6-二磷酸醛缩酶(EC4.1.2.13)是糖酵解和糖异生途径中的重要酶,催化果糖 1,6-二磷酸可逆的裂解为磷酸二羟丙酮和 3-磷酸甘油醛,广泛存在于动植物及微生物体内,为生

物体合成代谢提供能量。

测定原理

果糖 1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸生成 3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮,在磷酸丙糖异构酶和 α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化 NADH 和磷酸二羟丙酮生成 NAD 和 α-磷酸甘油,340nm 处吸光值的变化可反映果糖 1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿。

试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂五:液体×1 瓶,4℃避光保存。

酶液提取

1. 组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入1mL

提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后 4℃,10000g 离心 10min,取上清置冰上待测。

3. 液体:直接检测。

测定操作

1. 分光光度计预热 30min,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2. 取1mL石英比色皿,依次加入500μL试剂一,100μL试剂二,100μL试剂三,100μL试剂四,100μL试剂五,100μL粗酶液,充分混匀,记录 40nm处10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A1-A2

 

 

 

 

计算公式

1)按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min /mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T

=321.54×ΔA÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min /g)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T

=321.54×ΔA÷W

3)按照细胞数量计算

酶活单位定义:每 104个细胞每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min /104cell)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T

= 321.54×ΔA÷细胞数量

4)按照液体体积计算

酶活单位定义:每毫升液体每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

FDA(nmol/min /mL)= ΔA÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T=321.54×ΔA

V 反总:反应体系总体积,1mL;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×10 3 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,5 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

注意事项

配制好的试剂二、试剂三、试剂四 3 天内使用完。

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