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游离胆固醇(FC)含量测试盒 试剂盒

价格 350.00/盒 330.00/盒
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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/48样100管/96样

游离胆固醇(free cholesterol, FC)含量测定试剂盒说明书

微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

FC是构成细胞膜的主要成分,也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。

测定原理:

FC氧化酶催化FC生成△4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O24-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,在500nm有吸收峰,其颜色深浅与FC含量成正比。

自备仪器和用品:

水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配置:

试剂一:异丙醇 100mL(自备);

工作液:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

标准品:液体 1mL×1 支,浓度为 5 μ mol/mL4℃保存。

FC  的提取:

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~10001 的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声2秒,间隔3秒,总时间3min);然后 8000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.血清(浆)样品:直接测定。

测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到500nm,蒸馏水调零。

2. FC工作液在40℃水浴中预热 30min

3. 标准管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入4μL FC标准液和196μL FC工作液,5min

后于500nm测定A标准管。

4. 测定管:依次在微量石英比色皿/96孔板中加入4μL FC待测液和 196μL FC 工作液,5min后于500nm测定A测定管。

计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 血清(浆)中 FC含量计算:

FC 含量(μmol /dL= C 标准液×A 测定管÷A 标准管×100mL

=500×A 测定管÷A 标准管

C 标准液:5μmol/mL100 mL1dL=100 mL

2. 组织中 FC含量计算:

(1)按样本蛋白浓度计算

FC 含量(μmol/mg prot= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷Cpr

= 5×A 测定管÷A 标准管÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

FC 含量(μmol/g= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷W

= 5×A 测定管÷A 标准管÷W

C 标准液:5μmol/mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本质量,g/mL

3. 细胞、细菌中FC含量计算:

FC 含量(μmol/104cell= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞(104cell/L

=5×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞(104cell/L

C 标准液:5μmol/mL

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1. 血清(浆)中FC含量计算:

FC 含量(μmol /dL= C 标准液×A 测定管÷A 标准管×100mL

=500×A 测定管÷A 标准管

C 标准液:5μmol/mL100 mL1dL=100 mL

2. 组织中 FC  含量计算:

(1)按样本蛋白浓度计算

FC 含量(μmol/mg prot= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷Cpr

= 5×A 测定管÷A 标准管÷Cpr

(2)按样本鲜重计算

FC 含量(μmol/g= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷W

= 5×A 测定管÷A 标准管÷W

C 标准液:5μmol/mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本质量,g/mL

3. 细胞、细菌中FC含量计算:

FC 含量(μmol /104cell= C 标准液×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞(104cell/L

=5×A 测定管÷A 标准管÷细菌或细胞(104cell/L

C 标准液:5μmol/mL

注意事项:

最低检出限为1mmol/L

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