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β-淀粉酶测试盒试剂盒

价格	￥900.00/盒	￥850.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/24样100管/48样

β-淀粉酶（β-amylase，β-AL）试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

淀粉酶负责水解淀粉，主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。

测定原理：

还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。α-淀粉酶不耐酸，β-淀粉酶不耐热。根据上述特性，钝化其中之一，就可测出另一种淀粉酶的活力。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：30mL×1 瓶，常温保存，若有黄色晶体析出，需加热溶解后再用；

试剂二：15mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

称取0.1~0.2g样本（建议称取约0.1g 样本），加入1mL蒸馏水，研磨匀浆；将匀浆倒入离心管中，提取液在室温下放置提取15min，每5min振荡1次，使其充分提取；3000g，25℃离心10min，取上清液加蒸馏水定容至10mL，摇匀，即淀粉酶原液。

吸取上述淀粉酶原液1mL，加入4mL蒸馏水，摇匀，即为淀粉酶稀释液，用于（α＋β）淀粉酶总活力的测定。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长到540nm，蒸馏水调零。

2、测定操作表：

试剂名称（μL）	α-淀粉酶活力测定		总淀粉酶活力测定
试剂名称（μL）	对照管	测定管	对照管	测定管
淀粉酶原液	75	75
70℃水浴 15min 左右，冷却
淀粉酶稀释液			75	75
试剂一	150		150
将以上对照管、测定管和试剂二置于40℃恒温水浴中保温10min左右
试剂二	75	75	75	75
在 40℃恒温水浴中准确保温 5min
试剂一		150		150

混匀，95 度水浴 5min，冷却，取 200μL 至微量石英比色皿或96孔板中，540nm处读取吸光值，从左到右分别记为A1、A2、A3 和 A4。每个测定管需设一个对照管。

酶活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归曲线为y=3.7215x-0.1778；x为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

2、α-淀粉酶活性

（1）按照样本质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

α-淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=[(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.075×(A2-A1＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T=0.1075×(A2-A1＋0.1778) ÷Cpr

3、总淀粉酶活性计算

（1）按照样品质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

总淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=5.375×(A4-A3＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷3.7215×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T=0.5375×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr

4、β-淀粉酶活性计算

（1）按照样本质量计算

单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

β- 淀粉酶活性 (mg/min/g 鲜重 )= 淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性 =[5.375×(A4-A3 ＋

0.1778)-1.075×(A2-A1＋0.1778)]÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

β-淀粉酶活性（mg/min/mg prot）=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3＋

0.1778)-0.1075×(A2-A1＋0.1778)]÷Cpr

5：总淀粉酶稀释倍数；V 反总：反应体系总体积，0.15mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.075 mL；V 样总：提取液总体积，10 mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、标准条件下测定回归曲线为y=2.481x-0.1778；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。

2、α-淀粉酶活性

（1）按照样本质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

α- 淀粉酶活性 (mg/min/g 鲜重 )=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反总 ]÷(W×V 样 ÷V 样总)÷T=1.612×(ΔA＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活性单位。

α-淀粉酶活性（mg/min/mg prot）=[(ΔA＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T =0.1612×(ΔA＋0.1778) ÷Cpr

3、总淀粉酶活性计算

（1）按照样本质量计算

单位定义：每g组织每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

总淀粉酶活性(mg/min/g 鲜重)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T=8.06×(ΔA＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

总淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3＋0.1778)÷2.481×V 反总]÷（V 样×Cpr）÷T=0.806×(A4-A3＋0.1778) ÷Cpr

4、β-淀粉酶活性计算

（1）按照样本质量计算

单位定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

β- 淀粉酶活性 (mg/min/g 鲜重 )= 淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性

=[8.06×(A4-A3 ＋0.1778)-1.612×(A2-A1＋0.1778)]÷W

（2）按照蛋白质含量计算

单位定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1mg还原糖定义为1个酶活力单位。

β-淀粉酶活性（mg/min/mg prot）=淀粉酶总活性-α-淀粉酶活性=[0.806×(A4-A3＋

0.1778)-0.1612×(A2-A1＋0.1778)]÷Cpr

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