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主营产品: 生物技术,
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蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS)试剂盒说明书
分光光度法
产品内容:
提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体10mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体5mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体40mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体10mL×1瓶,4℃保存;
产品简介:
蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式之一。蔗糖磷酸合成酶(SPS)以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。
蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水
操作步骤:
一、测定样品提取:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定操作表:
按下表操作:
试剂名称(μL) |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
样本 |
30 |
30 |
||
蒸馏水 |
150 |
150 |
180 |
|
试剂一 |
150 |
|||
试剂二 |
30 |
|||
混匀,25℃准确水浴10min |
||||
试剂三 |
50 |
50 |
50 |
50 |
沸水浴中煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却 |
||||
试剂四 |
700 |
700 |
700 |
700 |
试剂五 |
200 |
200 |
200 |
200 |
混匀,沸水浴30min,冷却后,在480nm下测定各管吸光值。标准管和测定管只要做一管。每个测定管需要设定一个对照管。
三、SPS活力单位的计算:
1、 按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg/min/mg prot)={C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)}÷(V1×Cpr)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2、 按照样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS活性(μg/min /g鲜重)={C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)}÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准管:标准管浓度,1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.03mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间:10min。
上海优选生物科技有限公司
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