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可溶性酸性转化酶(S-AI)测试盒 试剂盒

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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/24样100管/48样

可溶性酸性转化酶(Soluble acid invertase, S-AI)试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

蔗糖转化酶(InvertaseIvr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖

代谢关键酶之一。根据最适pHIvr 分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。AI 的最适pH35AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AIB-AI)两种类型。S-AI主要存在于细胞液泡或自由空间中,最适pH4.5~5.0(酸性),通过降解液泡中蔗糖,调节液泡中蔗糖的利用和果实内糖类的积累。

测定原理:

S-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与S-AI活性成正比。

自备用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂 4

保存;

试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存;

粗酶液提取:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤和加样表:

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至510nm,蒸馏水调零。

2、样本测定(在EP管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL

测定管

对照管

样本

50

50

试剂一


200

试剂二

200


混匀, 37℃准确水浴 30min 后,95℃水浴 10min(盖紧,以防水分散失),流水冷却后充分

混匀(以保证浓度不变)

试剂三

125

125

混匀,95℃水浴10min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中, 510nm处记录各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。

S-AI 活性计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y =0.0016x-0.001x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

1)按蛋白浓度计算:

单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI 活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T

=20.8×(ΔA +0.001)÷Cpr

2)按鲜重计算:

单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI 活性(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T

=20.8×(ΔA +0.001)÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.05mLV2:加入提取液体积,1mLT:反应时间,30minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,g

b.96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y =0.0008x-0.001x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

1)按蛋白浓度计算:

单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI 活性(μg/min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T

=41.6×(ΔA +0.001)÷Cpr

2)按鲜重计算:

单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。

S-AI 活性(μg/min/g 鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2)

=41.6×(ΔA +0.001) ÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.05mLV2:加入提取液体积,1mLT:反应时间,30min

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本鲜重,g

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