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中性转化酶(NI)测试盒 试剂盒

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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/24样100管/48样

中性转化酶(Neutral invertase,NI)测试盒说明书

可见分光光度法

产品内容:

提取液:液体50mL×1瓶,4保存;

试剂一:液体50mL×1瓶,-20保存;

试剂二:粉剂×1瓶,4保存;临用前加入25mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4保存。

试剂三:液体30mL×1瓶,4保存 

产品简介:

蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,将高等植物Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。NI主要存在于细胞质中,负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。
    NI催化蔗糖分解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI活性。

试验中所需的仪器和试剂:

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

操作步骤:

一、粗酶液提取:   

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。   

二、测定步骤及加样表:

按下表操作:

试剂名称(μL)

测定管

标准管

样本

200

200

试剂一

/

800

试剂二

800

/

混匀,37℃准确水浴30min后,煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),流水冷却后充分混匀(以保证浓度不变)

试剂三

500

500

混匀,煮沸10min左右(盖紧,以防止水分流失)流水冷却后充分混匀,510nm处蒸馏水调零,记录各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸馏水稀释后测定(计算公式中乘以相应稀释倍数),ΔA=A测定-A对照。

三、N I 计算:

标准条件下测定的回归方程为y=0.0016x-0.001x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。

1、 按蛋白浓度计算

单位定义:37mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活单位。

NI活性(U/mg prot=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr)÷T

=20.8×(ΔA+0.001) ÷Cpr

2、 按鲜重计算

单位定义:37g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活单位。

NI活性(U/g=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷W

V1:加入反应体系中样本体积,0.2mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间:30min。

 

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