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α-葡萄糖苷酶（α - GC）测试盒 试剂盒

价格 ￥1050.00/盒 ￥1000.00/盒
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联系人： 伍雅君
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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/24样100管/48样

α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase, α-GC）试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖，不仅与细胞壁的松弛或加固有关，而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。

测定原理：

α-GC 分解对-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400n有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。

自备用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入12mL蒸馏水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，

加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。

2、加样表

试剂名称（μL）  

测定管  

对照管

试剂一  

120

试剂二  

150  

150

样本

30  

30

充分混匀，放入 37℃准确水浴 30min 后，立即放入 95℃水浴 5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）

试剂一


120

充分混匀，8000g，4℃，离心 5min，取上清液（在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂）

上清液  

70  

70

试剂三  

130  

130

充分混匀，室温静置 2min 后， 400nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。

每个测定管需设一个对照管。

α-GC 活力计算：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y = 0.32x-0.0027；x为标准品浓度（nmol/mL），y为吸光值。

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GC 活力(nmol/h/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.32×V反总]÷(V 样×Cpr)÷T

=62.5×(ΔA+0.0027)÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GC 活力(nmol/h/g 鲜重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.32×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=62.5×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GC 活力(nmol/h /104cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.32×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T

=0.125×(ΔA +0.0027)

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.3mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g； 500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，0.5h。

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为y=0.16x-0.0027；x为标准品浓度（nmol/mL），y为吸光值。

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GC 活力(nmol/h/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.16×V反总]÷(V 样×Cpr)÷T

 =125×(ΔA+0.0027)÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GC 活力(nmol/h/g 鲜重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.16×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)÷T

=125×(ΔA+0.0027) ÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每小时产生1nmol对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。

α-GC 活力(nmol/h/104cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.16×V反总]÷(500×V样÷V样总)÷T

=0.25×(ΔA +0.0027)

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；T：反应时间，0.5h。

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