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中性木聚糖酶测试盒 试剂盒

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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/24样100管/48样

中性木聚糖酶(Neutral XylanaseNEX)测定试剂盒说明书

微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生,能催化水解木聚糖,也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶,可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及 β-葡聚糖,降低酿造中物料的粘度,促进有效物质的释放,以及降低饲料中的非淀粉多糖,促进营养物质的吸收利用,因而广泛的应

用于酿造和饲料工业中,NEX 一般分离自最适生长pH6-8的微生物。

测定原理:

NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖,在沸水浴条件下进一步与 3,5-二硝基水杨酸发生显色反应,在 540nm 处有特征吸收峰,反应液颜色的深浅与酶解产生的还

原糖量成正比,通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率,可计算 NEX 活力。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、恒温水浴锅,可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

试剂组成和配制:

缓冲液:液体 65mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂二:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。

粗酶提取:

1. 发酵液:发酵液于 8000g4℃,离心 15min,取上清,作为待测样品。

2. 酶干粉:称约 0.1mg,加缓冲液 1mL,震荡溶解待测。

测定操作表:

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至540nm

2、操作表


对照管  

测定管

样品(μL

60  

60

缓冲液(μL)  

90  

90

试剂一(μL)  


60

试剂二(μL)  

90


混匀,盖紧瓶盖,50℃水浴,反应 30min,立即沸水浴 10min 灭活。(注意不要让盖子爆开,

以免进水,改变了反应体系)

试剂一(μL)  

60


试剂二(μL)  


90

混匀,沸水浴显色 5min,取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中,对照管调零,测定 A 540

 

 

NEX 计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y=1.6904x+0.0058R2=0.9989

1. 发酵液NEX活力计算

酶活定义:50℃,pH6.0条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力(nmol/min/mL=A540-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000

= 657×(A540-0.0058 )

2. 酶干粉 NEX 活力计算

酶活定义:50℃,pH6.0条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力(nmol/min/mg=A540-0.0058)÷1.6904÷150÷T×稀释倍数×1000÷W

= 657×(A540-0.0058 ) ÷W

150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V =300μL÷60μL=51000

转化因子,即 1mmol/L=1000μ mol/LW:样本质量,mg

b.96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=0.8452x+0.0058R2=0.9989

1. 发酵液 NEX 活力计算

酶活定义:50℃,pH6.0条件下,每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力(nmol/min/mL=A540-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000

= 1314×(A540-0.0058 )

2. 酶干粉 NEX 活力计算

酶活定义:50℃,pH6.0条件下,每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1nmol还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。

NEX 活力(nmol/min/mg=A540-0.0058)÷0.8452÷150÷T×稀释倍数×1000÷W

= 1314×(A540-0.0058 ) ÷W

150:木糖的分子量;T:反应时间,30min;稀释倍数=V 反总÷V =300μL÷60μL=51000:转化因子,即 1mmol/L=1000μ mol/LW:样本质量,mg

注意事项:

1. 吸光度变化应该控制在0.01~0.8之间,否则加大样品量或稀释样品,注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变;也可以延长或者缩短反应时间。

2. 试剂盒2-8℃保存,保质期3个月,建议尽快使用。

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