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β-木糖苷酶测试盒试剂盒

价格	￥1600.00/盒	￥1500.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/24样100管/48样

β-木糖苷酶（β-xylosidase）测定试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

测定原理

β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰，测定405nm光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min，取上清待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 液体：直接检测。

测定操作表

	对照管	测定管
酶液（μL）	200	200
试剂一（μL）		50
试剂二（μL）	400	350
混匀，45℃水浴 20min
试剂三（μL）	400	400
混匀，静置 5min，1mL 玻璃比色皿，对照管调零，测定A405 。

β-木糖苷酶活性计算公式

标准曲线：y=3.34x-0.001，R2=0.9991

1、按蛋白浓度计算

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质1min 内催化产生1 nmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/mg prot）=(A₄₀₅+0.001) ÷（3.34×138）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T×1000= 542.4×(A 405 +0.001)÷ Cpr

2、按样本重量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/g）=(A₄₀₅+0.001) ÷（3.34×138）×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T×1000= 542.4×(A 405 +0.001)÷W

3、按细胞数量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每 10⁴个细胞1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β -木糖苷酶活性（nmol/min/10⁴cell）=(A₄₀₅+0.001) ÷（3.34×138）×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量（万个）÷T×1000= 542.4×(A₄₀₅ +0.001) ÷ 细胞数量（万个）

4、按液体体积计算

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫升液体1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。

β-木糖苷酶活性（nmol/min/ mL）=(A₄₀₅+0.001) ÷（3.34×138）×V 反总÷V 样÷T×1000= 542.4×(A₄₀₅ +0.001)

V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，1mL；V 样：反应中样品体积，0.2mL；138：对硝基苯酚分子量；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样品质量，g；T：反应时间，20min；1000:1mmol/L=1000μmol/L

注意事项

1、吸光度变化应该控制在 0.01~0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参

与计算的稀释倍数要相应改变。

2、样品蛋白质含量需要另外测定，可选用BCA法测定蛋白含量试剂盒进行测定。

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