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果胶裂解酶测试盒 试剂盒

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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/48样100管/96样

果胶裂解酶(pectinate lyasesPL)试剂盒说明书

微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,

提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降

低能源消耗方面具有潜在的应用价值。

测定原理

果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4 糖苷键,生成在还原端C4C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 12mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。

酶液提取

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,

加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 培养液:直接测定。

测定操作表

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至235nm,蒸馏水调零。

2、操作表


对照管

测定管

试剂一(μL

120

120

40℃温育 3min

酶液(μL


20

试剂二(μL

60


混匀,40℃反应 30min

酶液(μL

20


试剂二(μL


60

混匀于微量石英比色皿/96 孔板测定 235nm 处吸光值 A,△A=A 测定管-A对照管。

 

 

酶活性计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 组织中PL活性

1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性(nmol/min/mg prot= A÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T

= 64.1×△A÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性(nmol/min/g= A÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T

= 64.1×△A÷W

2. 细菌、真菌 PL 活性

酶活性定义:在40℃,pH5.5 条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/104cell= A÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T= 64.1×△A÷细胞数量

3. 培养液 PL 活性

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半

乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性(nmol/min/mL= A÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T

= 64.1×△A

ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cmd:比色皿光径,1cmV 反总:反应

总体积,0.2mLV 样:反应体系中样本体积,0.02mLV 样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,30min

b. 96孔板测定的计算公式如下

1. 组织中PL活性

1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性(nmol/min/mg prot= A÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T

= 128.2×△A÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活性定义:在 40℃,pH5.5 条件下,每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性(nmol/min/g= A÷(ε×d)×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T

= 128.2×△A÷W

2. 细菌、真菌 PL 活性

酶活性定义:在 40℃,pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL活性(nmol/min/104cell=A÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T

 = 128.2×△A÷细胞数量

3. 培养液 PL 活性

酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。

PL 活性(nmol/min//mL= A÷(ε×d)×V 反总÷V 样÷T

= 128.2×△A

ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cmd:比色皿光径,0.5cmV 反总:反应总体积,0.2mLV 样:反应体系中样本体积,0.02mLV 样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,30min

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