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血钙浓度检测试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
血钙几乎全部存在于血浆中,所以血钙主要指血浆钙。血浆钙有离子钙和结合钙两种形式,
其中只有离子钙直接起生理作用,它与结合钙处于动态平衡,并受血液 pH 的影响。血钙水
平与多种重要的生理功能相关,过高或过低都会影响正常生理功能。本试剂盒用于检测血液
中游离钙浓度。
测定原理:
在强碱溶液中游离钙与 GBHA 反应生成红色钙-GBHA 复合物,在 520nm 有吸收峰;通过测定 520nm 吸光度,计算游离钙浓度。
自备仪器和用品:
可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、石英比色皿/96 孔板、无水甲醇、丙酮和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体×1 瓶(空瓶,试剂自备)。取10 mL试剂瓶。依次加入9 mL无水甲醇和1mL丙酮,盖紧混匀即可。
标准液:液体×1 瓶,3μmol/mL,4℃保存。
血钙浓度测定操作:
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到520nm,蒸馏水调零。
2. 空白管:取石英比色皿/96孔板,依次加入蒸馏水12μL,试剂一50μL,混匀;再加入试剂二50μL,混匀;最后加入试剂三100μL,混匀;静置5min后于520nm测定吸光度A空白管。做一个空白管即可。
3. 标准管:取石英比色皿/96孔板,依次加入标准液12μL,试剂一50μL,混匀;再加入试剂二50μL,混匀;最后加入试剂三100μL,混匀;静置5min后于520nm测定吸光度A标准管。做一个标准管即可。
4. 测定管:取石英比色皿/96孔板,依次加入血液样品12μL,试剂一50μL,混匀;再加入试剂二50μL,混匀;最后加入试剂三100μL,混匀;静置5min后于520nm测定吸光度A测定管。记为 A 测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次,最好做三次重复。
血钙浓度计算公式:
血钙含量(μmol/mL)= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 样品总=3×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准液:3μmol/mL; V 样总:样品总体积,1 dL=100 mL。
注意事项:
1. 宜早晨空腹采血,并且采血后应该尽快完成测定。
2. 静置 5 分钟后立即测定。
3. 加试剂三后,应该在 30 min 内完成该管的测定。
4. 最低检出限为0.1μmol/mL。
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