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血清铁浓度检测试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁,该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。
测定原理:
亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+,Fe2+进一步与2, 2’- 联吡啶显色,在520nm处有吸收峰,测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。
自备仪器和用品:
离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存。 临用前配制,加入15mL蒸馏水充分溶解。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。 临用前配制,加入469μL冰醋酸,加入15mL蒸馏水充分溶解。
标准液:液体×1 支(EP管),100μmol/L Fe3+标准液,4℃保存。
测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到520nm,蒸馏水调零。
2. 标准液解冻:提前取出标准液,置于室温下充分解冻后混匀。
3. 空白管:取EP管,依次加入125μL蒸馏水,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧,置于沸水浴5min,自来水冷却。加入62μL氯仿(自备),充分震荡混匀;室温10000rpm,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520nm 测定吸光度,记为A空白管。
4. 标准管:取EP管,依次加入125μL标准液,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧,置于沸水浴5min,自来水冷却。加入62μL氯仿,充分震荡混匀;室温10000rpm,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520nm测定吸光度,记为A标准管。
5. 测定管:取EP管,依次加入125μL血清,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧,置于沸水浴5min,自来水冷却。加入62μL氯仿,充分震荡混匀;室温10000rpm,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520nm测定吸光度,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
血清铁浓度计算公式:
血清铁含量(μmol/dL)=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总=10× (A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准液:100 μmol/L Fe 3+ 标准液;V 总:1 dL=0.1 L。
注意事项:
1、血清铁含量少,所用器皿(EP 管)需要注意,避免被铁污染。
2、试剂一和试剂二溶液不稳定,需现配现用,新配制的试剂只能当天使用。
3. 最低检出限为1μmol/L。
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