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血磷浓度检测试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
血磷主要指血中的无机磷,以无机磷盐的形式存在。血浆中钙、磷浓度关系密切,在以 mg/dL表示时,二者的乘积([Ca]×[P])为 30~40。当([Ca]×[P])>40,则钙和磷以骨盐形式沉积于骨组织;若([Ca]×[P])<35 则妨碍骨的钙化,甚至可使骨盐溶解,影响成骨作用。血钙和血磷含量的相对稳定依赖于钙、磷的吸收与排泄和钙化及脱钙两种代谢的相对平衡。上述平衡受到维生素 D3、甲状旁腺素和降钙素等激素的调节。
测定原理:
去除血清中有机磷后,无机磷盐与钼酸铵试剂生成磷钼酸,被硫酸亚铁还原后呈蓝色,在620nm有光吸收;通过测定620nm吸光度,计算血液中磷含量。
自备仪器和用品:
离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。 临用前配制,依次加入11mL蒸馏水充分溶解,再加入试剂二,充分混合。
标准液:液体×1 支,1mmol/L无机磷,4℃保存。
血磷浓度测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长到620nm,蒸馏水调零。
2. 取出标准液,室温解冻。
3. 血清预处理:吸取50μL血清,加950μL试剂一,混匀后室温8000rpm,离心10min,取上清液,待测。
4. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL蒸馏水,50μL试剂一,100μL试剂
三,混匀后静置10min,于620nm测定吸光度,记为A空白管。
5. 标准管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL标准液,50μL试剂一,100μL试剂
三,混匀后静置10min,于620nm测定吸光度,记为A标准管。
6. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入50μL上清液,50μL试剂一,100μL试剂
三,混匀后静置10min,于620nm测定吸光度,记为A测定管。
注意:空白管和标准管只需测定一次。
血磷浓度计算:
血磷含量(mmol/dL)=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×样品稀释倍数×V 样总=2×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准液:1 mmol/L;样品稀释倍数:(50μL血清+950μL试剂一)÷50μL血清=20。
注意事项:
1、 试剂三需临用前配制,如未用完,4℃保存,最多可使用3天;
2、 测定过程中,应尽量避免溶血,因为红细胞中有机磷酯进入血清后可被酶水解而使得血
清无机磷含量增高。
3、 最低检出限为0.1mmol/L。
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