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组织总磷含量测试盒 试剂盒

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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/48样100管/96样

组织总磷含量测定试剂盒说明书

可见分光光度法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

磷的存在形态包括无机磷与有机磷。无机磷主要指磷酸根,参与生物体内多种代谢,包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等。通过测定总磷与无机磷含量即可了解作物对磷的利用率,进而为合理施肥提供依据。

测定原理:

总磷经消化后,转化成无机磷。钼蓝法是测定无机磷含量的经典方法,一定条件下,钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质,通过测定660nm光吸收,即可计算无机磷含量,进而可计算出组织中总磷含量。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、离心机、水浴锅、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水和浓硫酸。

试剂组成和配置:

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存) (强腐蚀性,强氧化性)。

试剂二:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前配制,加入15mL蒸馏水,溶解后再加入10mL

试剂二,混匀。

标准品:液体×1 支,20μmol/L 无机磷标准液,-20℃保存。

有机磷消化:

取带盖试管,进入精确称取的约0.1 g组织,加浓硫酸1.0 mL,盖紧(防止水分散失)后沸水浴10min左右,待溶液呈黑色或棕色时取出。稍冷后,加试剂一200μL,充分混匀,盖紧后继续沸水浴,直到溶液呈透明状,取出室温冷却后,加蒸馏水8.8mL,充分混匀;室温,8000g,离心10min,取上清液待测。

测定操作:

1. 分光光度计预热30min,调节波长到660nm,蒸馏水调零。

2. 打开水浴锅,调节温度到40℃。

3. 空白管:取EP管,依次加入500μL蒸馏水,500μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10min后于660nm测定吸光度,记为A空白管。

4. 标准管:取EP管,依次加入50μL标准液,450μL蒸馏水,500μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10min后于660nm测定吸光度,记为A标准管。

5. 测定管:取EP 管,依次加入50μL上清液,450μL 蒸馏水,500μL试剂三,混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10min 后于660nm测定吸光度,记为A测定管。

注意:空白管和标准管只需测定一次。

 

 

组织总磷含量计算公式:

1) 按照蛋白含量计算

总磷含量(mmol/mg prot) = [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷Cpr= 1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

2) 按照样本质量计算

总磷含量(mmol/g )= [C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总÷W= 1×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W

C 标准液:1 mmol/L;V 总:上清液总体积,10 mL=0.01 L;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;

W:样品质量,g。

注意事项:

1. 试剂三需临用前配制,并且当天使用完毕。

2. 40min内完成比色。

3. 最低检出限为10μmol/L。

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