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土壤蔗糖酶(Solid-Sucrase, S-SC）试剂盒说明书
微量法
产品内容：
试剂一：甲苯1mL×1 瓶，4℃保存；（自备）
试剂二：液体7.5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前每瓶加入22mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂4℃保存；
试剂四：液体22mL×1 瓶，4℃保存。
产品说明：
S-SC 能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收，其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、
磷含量，微生物数量及土壤呼吸强度密切关，是评价土壤肥力的重要指标。
S-SC 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在510nm 有特征光吸收，在一定范围内510nm 光吸收增加速率与S-SC 活性成正比。
自备用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
操作步骤：
一、加样表：
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
风干土样（g） |
0.03 |
0.03 |
试剂一（μL） |
5 |
5 |
振荡混匀，使土样全部湿润，37℃水浴15min |
||
试剂二（μL） |
75 |
75 |
试剂三（μL） |
220 |
|
蒸馏水（μL） |
220 |
|
充分混匀，放入37℃水浴培养24 小时，10000 g，4℃，离心5min，取上清液 |
||
上清液（μL） |
85 |
85 |
试剂四（μL） |
215 |
215 |
充分混匀，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却，蒸馏水稀释10倍（可以吸取100μL，加入900μL 蒸馏水稀释；若吸光度大于4，可以加大稀释倍数），取200uL 至微量石英比色皿或96 孔板中510nm 处读吸光值A。计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。
二、S-SC 活性计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 4.9x -0.062；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
单位的定义：每天每g 土样中产生1mg 还原糖定义为一个S-SC 活力单位。
S-SC 活力(U /g 土样)=(A+0.062) ÷4.9×10×V 反总÷W÷T =20.4×(A+0.062)
10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V 反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样本质量，0.03g。
b. 用96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 2.45x -0.062；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
单位的定义：每天每g 土样中产生1mg 还原糖定义为一个S-SC 活力单位。
S-SC 活力(U /g 土样)=(A+0.062) ÷2.45×10×V 反总÷W÷T =40.8×(A+0.062)
10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V 反总：反应体系总体积：0.3mL；W：样品质量，0.03g。
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