广州川贝母聚合酶链式反应检测

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所在地	广东广州	可售量 10000把

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广州国检检测有限公司

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基本参数

认证类型	服务认证	行业	通讯电子
检测区域	佛山市中药的黄曲霉毒素检测	测试项目	佛山市中药的黄曲霉毒素检测
检测时间	佛山市中药的黄曲霉毒素检测	检测费用	800
收样地址	佛山市中药的黄曲霉毒素检测

2351 黄曲霉毒素测定法第一法
    本法系用高效液相色谱法（通则0512）测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 总量计），除另有规定外，按下列方法测定。
    色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（40：18：42）为流动相；采用柱后衍生法检测，①碘衍生法：衍生溶液为0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀释至1000ml制成），衍生化泵流速每分钟0.3ml，衍生化温度70℃； ②光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发波长λex = 360nm （或365nm），发射波长λex = 450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
    混合对照品溶液的制备  精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备溶液。精密量取贮备溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。
    供试品溶液的制备  取供试品粉末约15g（过二号筛），精密称定，置于均质瓶中，加入氯化钠3g，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速搅拌2分钟（搅拌速度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，量取续滤液20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
    测定法  分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液20～25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积， 从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 的量，计算，即得。
    第二法
    本法系用高效液相色谱-串联质谱法测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 总量计），除另有规定外，按下列方法测定。
    色谱、质谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以10mmol/L醋酸铵溶液为流动相A，以甲醇为流动相B；柱温25℃；流速每分钟0.3ml；按下表中的规定进行梯度洗脱。    
    以三重四极杆串联质谱仪检测；电喷雾离子源（ESI），采集模式为正离子模式；各化合物监测离子对和碰撞电压（CE）见下表。    
    系列混合对照品溶液的制备  精密量取黄曲霉毒素混合对照品溶液（黄曲霉毒素B1 、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2 的标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml）适量，用70%甲醇稀释成含黄曲霉毒素B2、G2浓度为0.04～3ng/ml，含黄曲霉毒素B1、G1浓度为0.12～10ng/ml的系列对照品溶液，即得（必要时可根据样品实际情况，制备系列基质对照品溶液）。
    供试品溶液的制备  同第一法。
    测定法  精密吸取上述系列对照品溶液各5μl，注入高效液相色谱-质谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸取上述供试品溶液5μl，注入高效液相色谱-串联质谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2的浓度，计算，即得。
    【附注】
    （1）本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。
    （2）残留有黄曲霉毒素的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%次氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。
    （3）当测定结果超出限度时，采用第二法进行确认。

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