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土壤硝态氮试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
硝态氮是指硝酸盐中所含有的氮元素,土壤中的有机物分解生成铵盐,被氧化后变为硝态氮。土壤中硝态氮是高等植物吸收氮的主要形式之一,其含量直接关系到作物的产量与品质。
测定原理
在浓酸条件下,NO 3- 与水杨酸反应,生成硝基水杨酸,硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)
呈黄色,在一定范围内,其颜色深浅与含量成正比,可比色测定计算得硝态氮含量 。
自备实验用品及仪器
蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、振荡仪。
试剂组成和配制
试剂一:粉剂×2 瓶,4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加2mL浓硫酸充分溶解。
试剂二:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
样本处理
按照土壤质量(g):蒸馏水体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 新鲜土样,加入1mL 蒸馏水)加入蒸馏水,置于振荡仪中振荡提取 1h,25℃,10000g 离心 10min,取上清待测。
测定操作表
空白管 |
测定管 |
|
样本(μL) |
20 |
|
蒸馏水(μL) |
20 |
|
试剂一(μL) |
80 |
80 |
充分混匀,25℃静置 30min |
||
试剂二(μL) |
1900 |
1900 |
混匀,25℃静置5min,取1mL1mL玻璃比色皿中测定410nm处吸光值A, △A=A 测定管-A 空白管 |
计算公式
标准曲线:y=0.633x-0.0397,R2=0.9997
NO3- —N 含量(mg/kg)=(△A+0.0397)÷ 0.633×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)
= 158×(△A+0.0397)÷W
V 反总:反应总体积,2mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V 样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
注意事项
1. 硝酸根不为土壤胶体吸附,且易溶于水,很容易在土壤内部移动,所以测定此指标时应注意采样深度一致。
2. 土壤经风干或者烘干很容易引起 NO3-—N 的变化,所以最好采用新鲜土壤进行测定,以准确反映该指标含量。
3. 试剂一配制好后尽快使用,4℃可保存一周。
4. 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性,操作时需做好防护措施。
5. 最低检出限为 62.7μg/kg。
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