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土壤漆酶测试盒试剂盒

价格	￥1250.00/盒	￥1150.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/48样100管/96样

土壤漆酶（Soil Laccase ，SL）试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

漆酶（Laccase）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解以

及生物检测方面有非常广泛的应用。

测定原理

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS 自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、震荡仪。

试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

工作液：粉剂×2 瓶，4℃避光保存，临用前每瓶加 10mL 试剂一溶解。

样本处理

将新鲜土样过40目筛，按照土样质量（g）：提取液体积（mL）为 1：5~10 的比例（建议称取0.1g土样，加入1mL提取液）加入提取液，30℃震荡提取30min，于 4℃，10000g，离心10min，取上清置于冰上待测。

测定操作

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到420nm，蒸馏水调零。

2. 取微量石英比色皿/96孔板，加入30μL上清液，再加入170μL工作液，混匀立即于420nm

处测定吸光值，记为 A1。

3. 记录完数据立即 30℃震荡反应 5min 后于420nm 处测定吸光值，记为 A2。△ A=A2-A1

酶活性计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

酶活性定义：每克土壤每分钟氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位（U）。

SL 活性（nmol/min /g）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T

= 37.04×△A÷W

ε：ABTS 毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体积，1mL； W：样本质量，g；T：反应时间，5min

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

酶活性定义：每克土壤每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位（U）。

SL 活性（nmol/min/g）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T

= 74.08×△A÷W

ε：ABTS 毫摩尔消光系数：36L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体积，1mL； W：样本质量，g；T：反应时间，5min

注意事项

1. 工作液需临用前配制，并且尽快使用，4℃保存一周，若变色则不能使用。

2. 测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用提取液进行适当的稀释再测定，并在

计算公式中乘以稀释倍数。

3. 反应完立即记录数据，以免造成逆向反应影响实验结果。

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上海市浦东新区港澳路271号1幢2层

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