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土壤全铁试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
铁元素是一种十分重要的植物营养元素,土壤中铁含量直接影响着植物吸收利用以及生长代谢。
测定原理
在 pH2-9范围内,盐酸羟胺将三价铁转化为二价铁,与邻菲罗琳反应生成橙红色配合物,在510nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿。
试剂组成和配制
提取剂:粉剂×1 瓶,4℃保存。
提取液:液体 100mL×2 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃避光保存。
样本处理
新鲜土样风干,过100目筛,按照土壤质量(g):提取剂质量(g)为 1:4 的比例(建议称取约0.1g土样,加入0.4g提取剂)缓慢加入提取剂于坩埚中,边加边搅拌均匀,然后在马弗炉中550℃熔融10min,然后在920℃熔融30min,趁热取出坩埚,将熔融物转入烧杯,边搅拌边加4mL提取液,必要时加盖,防止溶液溅出,溶解30min 后,5000g ,25℃离心10min,取上清液待测。
测定操作表
空白管 |
测定管 |
|
样本(μL) |
100 |
|
试剂一(μL) |
100 |
100 |
试剂二(μL) |
300 |
300 |
试剂三(μL) |
200 |
200 |
H2O(μL) |
400 |
300 |
充分混匀,25℃静置 20min |
||
于1mL玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定510nm处吸光值 A,分别记为A空白管和A测定管, △A=A测定管-A空白管 |
计算公式
标准曲线:y=0.1569x -0.0173,R2=0.9992
全铁含量(mg/kg)=(△A+0.0173)÷ 0.1569×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)
= 254.94×(△A+0.0173)÷W
V 反总:反应总体积,1mL;V 样:反应体系中加入样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,4mL,W:样本质量,g
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