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上海优选生物科技有限公司
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土壤酸性转化酶(S-AI)活性检测试剂盒
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:YX-C-B930
规格:50T/24S 产品说明:
S-AI 在 pH 为 4.5~5.0(酸性)条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是土壤微生物
蔗糖代谢关键酶之一。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水、甲苯。
操作步骤:
一、测定步骤及加样表:
1、分光光度计/酶标仪预热 30min,波长调至 540nm,蒸馏水调零。
2、标准液的稀释:将 10mg/mL 葡萄糖标准液用试剂一稀释至 4、3、2、1、0.8、0.6 mg/mL
的葡萄糖标准溶液备用。
3、加样表:
试剂名称 |
测定管 |
对照管 |
标准管 |
空白管 |
土样(g) |
0.1 |
0.1 |
- |
- |
试剂一(μL) |
- |
800 |
- |
800 |
试剂二(μL) |
800 |
- |
- |
- |
标准液(μL) |
- |
- |
800 |
- |
甲苯(μL) |
20 |
20 |
20 |
20 |
混匀,37℃准确水浴 1h 后,煮沸 10min 左右(盖紧,以防止水分散失),流水或冰浴冷 |
||||
却后充分混匀(以保证浓度不变),10000rpm,常温离心 10min,取上清 150μL 与 600μL 试剂一混合即将上清液稀释 5 倍。 |
||||
上清稀释液(μL) |
700 |
700 |
700 |
700 |
试剂三(μL) |
300 |
300 |
300 |
300 |
混匀,煮沸 10min 左右(盖紧,以防止水分流失),流水冷却后充分混匀,540nm 处蒸馏水调零,记录各管吸光值A,记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。
二、S-AI 活性计算:
1、 标准曲线的绘制:
以葡萄糖浓度为 x 轴,相应的ΔA 标准为 y 轴,绘制标准曲线,得到标准方程 y=kx+b;将ΔA 带入公式得到 x(mg/mL)
2、 S-AI 活性计算
单位定义:37℃每 g 土壤每天产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI(U/g)=x×V 酶促÷W÷T
V 酶促:酶促反应总体积,0.820mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间:1/24d;
注意事项:
1、如果加入试剂三,煮沸 10min 后有混浊物出现,建议离心除去沉淀(10000rpm,2min),取上清测定吸光度;
2、如果吸光值大于 1,可以将上清液再进行稀释;若吸光值较小,可以减少上清液稀释倍数。两种操作均要注意改变公式中的稀释倍数。
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