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H2S含量测试盒 试剂盒

价格 700.00/盒 650.00/盒
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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/48样100管/96样

H2S含量测定试剂盒说明书

微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

H2S是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

测定原理:

H2S与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在665nm处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S含量。

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂四:液体 8mL×1 瓶,4℃保存。

试剂五:液体 1.5mL×1 管,4℃避光保存。

样品处理:

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清(浆):直接测定。

操作表:

1、 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至665nm

2、 操作表


空白管

测定管

样品(μL


75

H2O(μL

75


试剂一(μL

75

75

充分震荡混匀

试剂二(μL

75

75

10000g4℃,离心 10min,去上清,留沉淀

H2O(μL

150

150

10000g4℃,离心 10min,去上清,留沉淀

试剂一(μL

75

75

试剂三(μL

75

75

充分震荡混匀

试剂四(μL

75

75

12000rpm4℃,离心 10min,取上清

试剂五(μL

15

15

混匀,25℃静置20min,于微量石英比色皿/96孔板中,空白管调零,测定665nm吸光值,记为 A665

H2S含量计算公式:

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为:y=0.0044xR2=0.9988

1)组织样品

a.按照蛋白浓度计算

H2S(μmol/mg prot=A665÷0.0044×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3 =0.727×A665 ÷Cpr

b.按照样本重量计算

H2S(μmol/g=A665÷0.0044×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3 = 0.727×A665 ÷W

(3) 细胞

H2S(μmol/104 cell=A665÷0.0044×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个))×10 -3 

=0.727×A 665 ÷细胞数量(万个)

2)液体样品 H2S(μmol/L=A665÷0.0044×V 反总÷V = 727×A665

V 反总:反应总体积,0.24mLV 样:反应中样品体积,0.075mLV 样总:加入提取液体积,1mLW:样品质量,gCpr:蛋白浓度,mg/mL

b.96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线回归方程为:y=0.0022xR2=0.9988

1)组织样品

a.按照蛋白浓度计算

H2S(μmol/mg prot=A665÷0.0044×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3 =1.454 ×A665 ÷Cpr

b.按照样本重量计算

H2S(μmol/g=A665÷0.0044×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3 = 1.454×A665 ÷W

(3) 细胞

H2S(μmol/104cell =A665÷0.0044×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个))×10-3 

=1.454×A665 ÷细胞数量(万个)

2)液体样品 H2S(μmol/L=A665÷0.0044×V 反总÷V = 1454×A665

V 反总:反应总体积,0.24mLV 样:反应中样品体积,0.075mLV 样总:加入提取液体积,1mLW:样品质量,gCpr:蛋白浓度,mg/mL

注意事项

最低检出限为8μmol/L

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