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上海优选生物科技有限公司
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单胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能，其活
性能反映肝纤维化的程度。此外，MAO活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱，从而引发多种病症。
测定原理：
MAO催化产生H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与单胺氧化酶活性成线性关系。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 19.2mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体 1mL×1 支，4℃保存；
粗酶液提取：
1. 称取约0.1g样品，加1mL预冷的提取液一充分冰浴匀浆，1000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1mL预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1mL试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心30min，弃上清；加入1.0mL预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心40min，弃上清；沉淀加入预冷的1.0 mL试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定），取上清置于冰上待测。
3. 血清：直接测定。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。
2、MAO 检测工作液的配制：用时将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混匀，待用；用不完的试剂4℃可保存一周；
3、测定前将MAO检测工作液在37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴10min以上。
4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本和240μL工作液，立即混匀并计时，记录500nm下20s吸光值A1和1min20s后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
MAO 活力单位的计算
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、血清（浆）MAO 活力的计算
单位定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
MAO（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=3333×ΔA
2、动物组织 MAO 活力的计算
（1）按蛋白浓度计算
单位定义 ：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
MAO（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr)÷T
=3333×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
MAO（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W×V 样÷V 样总）÷T
=3333×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2.5×10-4 L；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5×103 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、血清（浆）MAO 活力的计算
单位定义 ：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
MAO（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=6666×ΔA
2、动物组织 MAO 活力的计算
（1）按蛋白浓度计算
单位定义 ：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
MAO（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr)÷T
=6666×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟催化产生1nmol氧化型邻联茴香胺为一个酶活力单位。
MAO（nmol/min/ g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W× V 样÷V 样总）÷T
=6666×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，2.5×10-4 L；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5×103 L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
注意事项：
1、吸光度变化应该控制在 0.01～0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参
与计算的稀释倍数要相应改变。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。
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