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植物脱氢酶(SDHA)测试盒 试剂盒

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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/24样100管/48样

植物脱氢酶(Plant dehydrogenase, pDHA)试剂盒说明书

微量法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

生物体的脱氢酶(Plant dehydrogenase , DHA)的活性在很大程度上反映了生物体的活性状态,能直接表示生物细胞对其基质降解能力的强弱。

测定原理:

受氢体 2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride,即TTC)在细胞呼吸过程中接受氢以后,其还原产物三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone,即TF)呈现红色,在波长485nm处有最大吸收峰,测定其485nm吸光值,即得植物脱氢酶活性。

需自备实验仪器及用品:

恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、研钵、滤纸、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰、蒸馏水和乙酸乙酯。

试剂的组成和配制:

试剂一:粉剂×1瓶,使用前加少量水溶解,定容至50mL,避光、4℃保存(尽量现配现用)。

试剂二:液体 100mL×1瓶,4℃保存。

试剂三:乙酸乙酯,自备。

样品处理:

称取0.1g的植物组织,用双蒸水清洗3-4次,用滤纸吸干水分,备用。

测定步骤和操作表:

1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至485nm,蒸馏水调零。

2、操作表


对照管

测定管

样品(g

0.1

0.1

试剂一(mL


1

试剂二(mL

2

1

充分混匀,37℃,暗培养 3h,取出后立即冰浴 5min,过滤,去滤液,尽量用滤纸吸干样品,

置于研钵中。

试剂三(mL

1

1

充分研磨,吸取红色液体于离心管中,用少量试剂三冲洗研钵,一起加入离心管,用试剂三

定容至 2mL10000rpm4℃,离心 5min,取上清,于微量石英比色皿/96 孔板,测定 485nm

处测定管和对照管吸光值。ΔA=A 测定-A 对照

脱氢酶活力计算:

酶活单位定义:在37℃时,每小时每克样品使反应体系OD值每增加0.01为一个酶活单位。

计算公式:脱氢酶活性(U/g.h=ΔA÷0.01÷W÷T

=300×ΔA÷W

T:反应时间,3hW:样品质量,g

 

注意事项:

1. 配制好的试剂一避光保存于 4℃,尽量在一周内使用,若出现红色,则不能使用。

2. 试剂三易挥发,有毒,为了您的健康,请穿实验服,戴口罩,戴乳胶手套操作。

3. 反应完成后立即冰浴以终止反应,并去除干净残留的反应液。

4. 如果测定出来的吸光值较大,需把样品适当稀释再进行测定。

5. 试剂盒 2-8℃保存。

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