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乙醇酸氧化酶测试盒试剂盒

价格	￥1080.00/盒	￥1020.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/48样100管/96样

乙醇酸氧化酶（glycollic oxidase, GO）试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.1）是植物光呼吸代谢中的关键酶，也是光下合成草酸的关键酶，它催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，对研究光呼吸代谢过程及其调控具有重要意义。

测定原理

乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在324nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板。

试剂组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加5mL双蒸水溶解。（配制好3天使用完）

试剂三：液体 2mL×1 支，4℃保存。

酶液提取

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。12000g， 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定操作表

	测定管
样本（μL）	10
试剂一（μL）	130
试剂二（μL）	40
试剂三（μL）	20
充分混匀，立即于微量石英比色皿/96孔板中测定324nm处10s和190s吸光值A1和A2，△A=A2- A1

酶活性计算公式

a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1．按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO 活性（nmol/min/mg prot）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 392×△A÷Cpr

2．按照样本质量计算

酶活性定义：每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO 活性（nmol/min /g）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 392×△A÷W

ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min

b. 用96孔板测定的计算公式如下

1．按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO 活性（nmol/min /mg prot）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 784×△A÷Cpr

2．按照样本质量计算

酶活性定义：每克组织每分钟氧化1nmol乙醇酸所需的酶量为一个酶活力单位。

GO 活性（nmol/min/g）=△A÷ε÷d×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T= 784×△A÷W

ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17L/mmol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，3min

注意事项

1. 测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

2. 色素含量较高的样品，可在提取酶时加活性炭吸附。

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上海市浦东新区港澳路271号1幢2层

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