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考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号: YX-W-C201
规格: 100T/96S
产品说明:
微量法
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸馏水。
操作步骤:
一、吸光值测定
1. 分光光度计预热30 min 以上,蒸馏水调零。
2. 空白管:取0.5 mL EP管,加入40μL 蒸馏水,250μL 试剂一,混匀后室温静置10min,取200μL 于微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,记为A 空白管。
3. 标准管:取0.5 mL EP管,加入40μL 标准液,250μL 试剂一,混匀后室温静置10min,取200μL 于微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,记为A 标准管。
4. 测定管:取0.5 mL EP管,加入40μL 待测液,250μL 试剂一,混匀后室温静置10min,取200μL 于微量玻璃比色皿/96孔板,595nm 比色,10~20min 完成比色,记为A 测定管。
二、蛋白质含量:
C 待测(μg/mL)=50×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准管:标准品蛋白质浓度,50μg/mL。
注意事项:
1. 加考马斯亮蓝后,在10~20min 内吸光值相对较稳定,因此须在10~20min 完成比色。
2. 不宜用石英比色皿,可用玻璃或塑料比色皿,测完成后立即用95%乙醇冲洗。
3. 测定前用1~2 个样做预实验,确保蛋白浓度在0~100μg/ml 范围内,否则需要做相应稀释。
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