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BCA 蛋白浓度测定试剂盒
货号:YX-W-C202
规格:500 微孔(50T) 保质期:有效期 1 年。
产品简介:
碱性条件下,蛋白将 Cu2+ 还原为 Cu+ , Cu+ 与 BCA 试剂形成紫蓝色的络合物,测定其在
562nm 处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。操作说明:
一. 微孔酶标仪法
a. 配制工作液:根据标准品和样品数量,按 50 体积 BCA 试剂加 1 体积 Cu 试剂(50:1)配制成 BCA
工作液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。
b. 稀释标准品:取 10 微升 BSA 标准品用 PBS 稀释至 100 微升(样品一般可用 PBS 稀释),使终浓度为
0.5 mg/ml。将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20 微升加到 96 孔板的蛋白标准品孔中,加 PBS 补足至 20 微升。
c. 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释),加 20 微升到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。
d. 各孔加入 200 微升 BCA 工作液,37℃放置 15-30 分钟。用酶标仪测定 A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
二. 分光光度计法
如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。 步骤如下:
1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量,按 50 体积 BCA 试剂加 1 体积 Cu 试剂(50:1)配制成 BCA 工作
液,充分混匀(混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。
2. 稀释标准品:取 100 微升 BSA 标准品用 PBS 稀释至 1ml(样品一般可用 PBS 稀释),使终浓度为
0.5mg/ml。
3. 取八支(或者更多)5ml 离心管,标上号,按下表加入试剂。
离心管号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7(样品管 1) |
8(样品管 2) |
9(样品管 3) |
标准蛋白 BSA |
0 |
40ul |
80ul |
120ul |
160ul |
200ul |
200ul 适当稀释 的样品 1 |
200ul 适当稀释 的样品 2 |
…… |
PBS |
200ul |
160ul |
120ul |
80ul |
40ul |
0 |
0 |
0 |
0 |
BCA 工 作液 |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
2ml |
4. 37℃放置 15-30 分钟。用分光光度计测 562nm 处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。
注意事项:
1. 长期不用时,Cu 试剂与 PBS 稀释液可置于 2-8℃保存,如发现细菌污染则应丢弃。BCA 试剂在低温条件下出现结晶沉淀时,可 37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。
2. 样品中若含有较多干扰物质时,请采用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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