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葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)测试盒试剂盒

价格	￥2800.00/盒	￥2650.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/48样100管/96样

葡萄糖-6-磷酸酶（G6P)试剂盒说明书

紫外分光光度法

产品内容：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体47.5 mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 支，-20℃保存；

试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；

试剂四：液体×1 支，-20℃保存；

产品说明：

葡萄糖-6-磷酸酶（(glucose 6 phosphatase，G6Pase，EC 3.1.3.9）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶，在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。

G6P 催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖，变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH，在340nm下测定NADH生成速率，即可反映G6P 活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本的前处理：

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

工作液的配制：临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用；用不完的试剂4℃保存一周；

2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）预热5分钟。

3、在1mL 石英比色皿中加入50μL 样本和950μL 工作液，立即混匀，记录340nm 处初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

注意：在该试剂盒中，若ΔA 大于0.3，需将样本用提取液稀释适当倍数后测定，使ΔA 小于0.3 可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。

G6P 活性计算：

1、血清（浆）G6P 活力计算

单位定义：每毫升血清（浆）每分钟生成1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

G6P（U/mL））＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=1608×ΔA

2、组织、细菌或细胞中G6P 活力计算

（1）按样本蛋白浓度计算

单位定义：每mg 组织蛋白每分钟生成1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

G6P（U/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位定义：每g 组织每分钟生成1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

G6P（U/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位定义：每1 万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。

G6P（U/10⁴ cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.215×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。