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果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)测试盒

价格	￥1800.00/盒	￥1700.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/48样100管/96样

果糖-1,6-二磷酸酶(Fructose 1,6-bisphosphatase，FBP)

试剂盒说明书

微量法

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

果糖-1,6-二磷酸酶又称果糖 1,6-二磷酸酯酶，催化 1,6-二磷酸果糖和水生成6-磷酸果糖和无机磷，在糖的异生代谢和光合作用同化物蔗糖的合成中起关键性的作用。

测定原理

FBP催化 1,6-二磷酸果糖和水生成 6-磷酸果糖和无机磷，在反应体系中添加的磷酸葡萄糖异构酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算FBP活性。

需自备的仪器和用品

分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入20mL试剂四充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；

试剂二：液体×1 支，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；

试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂 4℃保存；

试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；

样本的前处理

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂一、二、三 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热10分钟。

3、加样表：

试剂名称（μL）	测定管
样本	20
试剂二	10
试剂三	10
试剂一	160

将上述试剂按顺序加入微量石英比色皿或96孔板中，立即混匀，加入最后一个试剂的同时开始计时，在340nm波长下记录反应1min后吸光度A1和反应 6min 后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。

FBP 活性计算

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V样×Cpr) ÷T

=321.5×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T

=321.5×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1nmol的NADPH定义为一个酶活力单位。

FBP（nmol/min/10⁴cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V样÷V样总) ÷T

=0.643×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。