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UDPG焦磷酸化酶（UPG）测试盒试剂盒

价格	￥2500.00/盒	￥2370.00/盒
起订量	≥1	≥2
所在地	上海上海	可售量 10000盒

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	检测试剂
用途	生化检测	产品规格	50管/48样100管/96样

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶

（UDP-glucose pyrophosphosphprylase ，UGP）试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。

测定原理

UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将 NADP转化为NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1mL石英比色皿。

试剂组成和配制

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1 瓶，-20℃避光保存。临用前加 5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂五：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。

酶液提取

1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g 离心10min，取上清置冰上待测。

2. 细胞：按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g 离心10min，取上清置冰上待测。

3. 液体：直接检测。

测定操作

1. 分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2. 取1mL石英比色皿，依次加入500μL试剂一，100μL试剂二，100μL试剂三，100μL试剂四，100μL试剂五，100μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处30s的吸光值A1和330s的吸光值A2，△A=A2-A1

计算公式

（1）按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min/mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T

=321.54×ΔA÷Cpr

（2）按照样本质量计算

酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min/g）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(W×V 样÷V 样总) ÷T

=321.54×ΔA÷W

（3）按照细胞数量计算

酶活单位定义：每 10⁴个细胞每分钟消耗1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min/10⁴cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T

=321.54×ΔA÷细胞数量

（4）按照液体体积计算

酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1nmol的NADP定义为一个酶活力单位。

UGP（nmol/min/mL）＝ΔA÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T=321.54×ΔA

V 反总：反应体系总体积，1mL；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项

配制好的试剂二、试剂三、试剂四3天内使用完。

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上海市浦东新区港澳路271号1幢2层

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