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植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶(TPI)测试盒 试剂盒

价格 2500.00/盒 2400.00/盒
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基本参数

品牌 优选生物/Sinobestbio 产地 上海
产品等级 优级品 产品用途 检测试剂
用途 生化检测 产品规格 50管/48样100管/96样

植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶

Triose-phosphate isomeraseTPI)试剂盒说明书

紫外分光光度法

注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

产品内容:

    提取液一:液体50mL×1瓶,4℃保存。

提取液二:液体25mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体30mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5mL蒸馏水充分溶解。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂×1瓶,-20℃避光保存。临用前加5 mL蒸馏水充分溶解。

产品说明:

植物叶绿体中磷酸丙糖异构酶是光合作用中参与calvin循环的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮之间的转化,磷酸二羟丙酮能快速透过叶绿体的包膜进入细胞质,并在其中逐步转化为蔗糖。

磷酸丙糖异构酶将磷酸二羟丙酮转化为3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛与NAD3-磷酸甘油醛脱氢酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH340nm处的吸光度变化反映了磷酸丙糖异构酶的活性的高低。

自备仪器和用品:

天平、低温离心机、研钵、震荡仪、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。

操作步骤:

一、酶液提取

按照植物组织质量(g):提取液体积(mL)1510的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于4℃1000g离心5min,取上清在4℃4500g离心20min,去上清,取沉淀加0.5mL提取液二,置于震荡仪上震荡30s溶解,置冰上30min,重复操作一次(或者震荡溶解后超声,超声条件为功率200W,破碎3s,间歇7s,总时间1min),然后4℃12000g离心10min,取上清待测。

二、测定操作

1. 分光光度计预热30min,调节波长至340nm,蒸馏水调零。

2. 1mL石英比色皿,依次加入600μL试剂一,100μL试剂二,100μL试剂三,100μL试剂四,100μL粗酶液,充分混匀,记录340nm10s的吸光值A1310s的吸光值A2△A=A2-A1

三、浓度计算:

(1) 按照样本蛋白浓度计算

酶活单位定义:每毫克组织蛋白每分钟生成1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

TPInmol/min /mg prot= ΔA÷ε×d×V反总÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

2)按照样本质量计算

酶活单位定义:每克组织每分钟生成1 nmolNADH定义为一个酶活力单位。

TPInmol/min /g= ΔA÷ε×d×V反总÷(W ×V÷V样总) ÷T=160.77×ΔA÷W

V反总:反应体系总体积,1mLεNADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cmd:比色皿光径,1cmV样:加入样本体积,0.1mLV样总:加入提取液体积,0.5mLT:反应时间,5 minCpr:样本蛋白质浓度,mg/mLW:样本质量,g

注意事项:

配置好的试剂二、试剂三、试剂四3天内使用完。

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