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还原型谷胱甘肽（GSH）生化检测测定

价格	￥24.00/样	￥22.00/样
起订量	≥10	≥50
所在地	上海上海	可售量 10000样

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基本参数

品牌	优选生物/Sinobestbio	产地	上海
产品等级	优级品	产品用途	生化测定
用途	科研检测

还原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质，在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

测定原理：

DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度与GSH含量成正比。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体×1 瓶，4℃避光保存。

粗酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

GSH 测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。

3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μL蒸馏水，140μL试剂二，40μL试剂三，混匀静置2min 后测定412nm吸光度A1。

4. 测定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，依次加入20μL上清液，140μL试剂二，40μL试剂三，混匀静置2min后测定412nm吸光度A2。

注意：空白管只需要测定一次。

GSH 含量计算公式：

GSH 标准曲线公式：y=1.5x（x为GSH浓度，μmol /mL；y为吸光值）

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

（1）按蛋白浓度计算

GSH（μmol/mg prot）=(A2－A1) ÷1.5×V 反总÷V 样÷Cpr =6.67×(A2－A1) ÷Cpr

（2）按样本质量计算

GSH（μmol/g）=(A2－A1) ÷1.5×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)=6.67×(A2－A1) ÷W

（3）按细胞数量计算

GSH（μmol/10⁴cell）=(A2－A1) ÷1.5×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)

=6.67×(A2－A1) ÷细胞数量

（4）按液体体积计算

GSH（μmol/mL）=(A2－A1) ÷1.5×V 反总÷V 样 =6.67×(A2－A1)

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样总：上清液总体积，1 mL；V 样：加入反应体系中上清

液体积，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量

b.使用96孔板测定的计算公式如下

GSH 标准曲线公式：y=0.75x（x 为GSH浓度，μmol/mL；y为吸光值）

（1）按蛋白浓度计算

GSH（μmol/ mg prot）=(A2－A1) ÷0.75×V 反总÷V 样÷Cpr =13.34×(A2－A1) ÷Cpr

（2）按样本质量计算

GSH（μmol/g）=(A2－A1) ÷0.75×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)=13.34×(A2－A1) ÷W

（3）按细胞数量计算

GSH（μmol /10⁴cell）=(A2－A1) ÷0.75×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)

=13.34×(A2－A1) ÷细胞数量

（4）按液体体积计算

GSH（μmol/ mL）=(A2－A1) ÷0.75×V 反总÷V 样 =6.67×(A2－A1)

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样总：上清液总体积，1mL；V 样：加入反应体系中上清

液体积，20μL=0.02 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量

注意事项：

1. 试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。

2. 最低检出限为1mmol/L。

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