不含药物) ；

Ab: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物) 。

Cell line : HEK293

Medium : DMEM, 10% FBS

Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours

Cell line : U87, SK-HEP1 Medium : DMEM, 10% FBS

Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)

Incubation : 37°C, 5% CO 2, 2 hours

注：如果待测药物有氧化性或还原性，可在加入 CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉待测药物的影响。当待测药物影响比较小的情况下可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。

4.保存条件

4°C 一年

-20°C 两年

长期保存，建议避光

5.注意事项

1）CCK-8的培养时间一般为 1-4小时，但在培养 30分钟左右即可取出肉眼 观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，

CCK-8 的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。

2）使用 96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面， 由于 96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法， 改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把 96孔板置 于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

3）本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。 4）加入药物中如含有金属，对 CCK-8显色有影响。终浓度为 1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降 低。如果终浓度是10mM的话，将会 100% 抑制。

5）培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

6）本产品可以检测，但不能检测酵母细胞。向 100μL培养液中加入 10μLCCK-8 溶液，并培养 1-4小时或过夜。

7）CCK-8试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。

8）要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。

9）建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。

10）以下方法可以终止 CCK-8反应 (96 孔板) ：

a.在显色反应后，将培养板放置 4°C冰箱内。b.每孔加 10μL0.1MHCl溶液。(c). 每孔加10μL1% (w/v) 的 SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。

注意：反应停止后，应在 24 小时内测定。11）本产品仅限于专业人员的科学研究用， 不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

12）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

CCK-8法与普通的MTT法相比，具有显著特点：
★灵敏度高，数据可靠，重现性好
★操作简便，省时省力
★水溶性，不需要换液，尤其适合于悬浮细胞
★无需放射性同位素和有机溶剂，对细胞毒性低
★为1瓶溶液，毋需预制，即开即用
★适合于高通量药物筛选
CCK-8用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
CCK-8试剂盒在国内知名科研院所、重点大学、1医院被广泛应用，国际认可度高，使用CCK-8发表的中外文献达600多篇，其中截止08年底SCI影响因子IF＞10分的论文有37篇，1高IF26.5分
[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics33, 172 - 176 (01 Feb 2003)]
CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较

CCK-8试剂毒性：CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性，不伤害细胞，细胞可重复利用

目前直接使用单位：

北京大学、北京大学医学部、清华大学、北京林业大学、中国人民1军总医院（301医院）、中国食品药品研究所（中检所）、中国协和医科大学基础研究所（基础所）、北京协和医院、军科院、复旦大学、广东省农科院果树研究所、杭州师范大学、河南农业大学、黑龙江省农垦科研育种中心、华东师范大学、华中农业大学、吉林省农科院生物技术中心、吉林省农业科学院、吉林省农业科学院生物技术研究中心、江南大学、江苏省农业科学院、南京大学、南京农业大学、南京农业大学水稻研究所、内蒙古科技大学、山东师范大学、山西省农业科学院棉花研究所、上海辰山植物科学研究中心、上海辰山植物园、上海大学、上海交通大学、上海隆平农业生物技术有限公司、上海农科院、上海应用技术学院、深圳华大基因研究院、沈阳农业大学、四川大学、四川农业大学生理院生化教研室、苏州大学、同济大学、潍坊科技学院、西北农林科技大学、扬州大学、浙江大学、浙江省农业科学院、中国科学院动物研究所、中国科学院青岛生物能源与过程研究所、中国科学院微生物研究所、中国农业大学、中国农业科学院、中国农业科学院生物技术研究所、中国农业科学院油料作物研究所、中国农业科学院油料作物研究所、中国农业科学院植物保护研究所、中国热带农业科学院生物技术研究所、中国热带农业科学院橡胶研究所、中国水稻研究所、中科院成都生物科研所、中科院上海计算生物学研究所和中科院植生所等单位。

产品订购说明：

1、绝大部分产品备有现货（公司库存现货5000多种），一般情况下都能订货当日发货
2、部分非常用产品，需提前1－2日预订，海外期货则需要提前3-6周预订。
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Cell Counting Kit-8，简称CCK-8试剂盒或CCK8试剂盒，是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度检测的试剂盒。
WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还 原生成橙黄色的
formazan(参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

图1. WST-8检测原理图 (EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂)

WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。
WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。
酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。
WST-8对细胞无明显毒性。加入CCK-8溶液显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到1佳测定时间。

本试剂盒可以测定500个样品。
包装清单：

保存条件：
4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存两年有效。
注意事项：
由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈1容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。
本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。
用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。