苏州北科纳米科技有限公司
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Protein A/G包被琼脂糖磁珠Protein A/G包被琼脂糖微球Magarose-ProA/G

价格 1500.00/瓶
起订量 ≥1
所在地 江苏 苏州 可售量 10000瓶

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基本参数

品牌 北科纳米 型号 齐全
加工定制 产地 江苏
公差 0.01 制作工艺 熔接
形状 条形 表面处理 电镀
适用范围 电镀


货号 CAS号 编号 包装 参数 库存 补货期 价格
BK2021081040 CAS BK2021081040 100 0

一、概述

Magarose-ProA(ProG、ProA/G、ProL)抗体纯化磁珠系列产品是由NHS活化的磁性琼脂糖微球与Protein A(or Protein G)共价结合形成的复合微粒。与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比,该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,洗脱条件更均一,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。本产品为微米级磁性微球,熟练操作可在15 min内完成抗体吸附过程,30 min内完成抗体纯化流程。本产品可重复使用,适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化,也可用于抗体固定及其它相关研究。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别,Magarose-ProA(roG、ProA/G、ProL)磁珠与不同抗体的亲和性比较参见

二、产品特性

产品名称

Magarose-ProAProGProA/GProL

货号

PMAG008

磁珠浓度

25% (v/v)in PBST(含0.05% NaN3

配基密度

/

介质

6%交联磁性琼脂糖

粒径

20-45μm

配体结合

~40 mg Human IgG /ml磁珠

保存

2~8℃保存一年

注:磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关,此处仅作参考值。


三、使用方法

1.缓冲液

Binding/Washing buffer PBSTpH 7.2~7.4: 137 mM NaCl,2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20;

Elution buffer: 100 mM Glycine, 0.1% Tween-20, pH 2.5;

Neutrilization buffer: 1.0 M Tris-HCl, pH 9.0;

2.操作流程(以纯化人血清IgG为例)

1) 样品处理:取人血清100 μL至1.5 mL EP管中,接着加入900 μL Binding/Washing buffer,充分混匀。

2) 磁珠预处理:将抗体纯化磁珠漩涡振荡30 s,使磁珠充分重悬;取100 μL 10%(v/v)磁珠悬液置于另一新的1.5 mL EP管中。对磁珠悬液进行磁性分离,弃上清液,用1 mL Binding/Washing buffer洗涤2次,磁性分离,管中磁珠可直接用于抗体分离。

注:该步骤磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节,当目标抗体的浓度大于150 μg/mL时,用户可取1.2~1.5倍磁珠用量(计算方式:如1.5*样品中目标抗体含量/磁珠最大结合量),若目标抗体浓度过低,如低于70 μg/mL时,客户为了提高抗体回收率,可增加磁珠用量,如提高至3倍磁珠用量。

3) 抗体吸附:在步骤2预处理的磁珠管中加入步骤1处理的样品溶液,漩涡振荡均匀,在室温下(约25℃)置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管,促使样品和磁珠充分接触并吸附,翻转约15 min后进行磁性分离,移弃上清液。

4) 磁珠洗涤:向EP管中加入1 mL Binding/Washing buffer,振荡重悬磁珠后进行磁性分离,移弃上清液;该操作重复3次。

5) 抗体洗脱:在上述完成磁珠洗涤的EP管中加入0.5~1.0 mL Elution buffer,用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬,然后在室温下(约25℃)置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管,翻转10 min后进行磁性分离,收集上清液至新的EP管。

注:该步骤Elution buffer用量,建议客户使最终洗脱的抗体浓度控制在0.6~1.2 mg/mL,此时第1次洗脱条件中95%以上的抗体将被洗脱下来;若Elution buffer用量过少,会导致部分抗体在第1次洗脱时仍然留在磁珠上,从而导致抗体回收率降低。

6) 抗体中和:在步骤5抗体洗脱液中加入一定量的Neutrilization buffer,一般为抗体洗脱体积的1/10,最终使洗脱的抗体pH值保持中性环境,以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。

7) 磁珠后处理:使用后的磁珠用Elution buffer洗涤2次,磁性分离,弃上清液;接着用Binding/Washing buffer洗涤3次,磁性分离,弃上清液,加入100 μL Storage buffer重悬磁珠 ,置于2~8℃保存。


3.磁珠再生

1) 磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上,为了保证磁珠的使用效率,建议持续使用5次后进行磁珠再生处理。

2) 按每1 mL 25%(v/v) 磁珠加入2 mL 1%(v/v)Triron X-100磁珠再生缓冲液,振荡均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转混合,10 min后进行磁性分离,弃上清液。

3) 立即加入1 mL Binding/Washing buffer进行重悬,然后磁性分离,弃上清液,重复该操作3次。

4) 加入1 mL Storage buffer重悬磁珠,2~8℃保存。


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