DEAE弱阴离子交换琼脂糖磁珠
价格 | ¥1500.00/瓶 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 江苏 苏州 | 可售量 10000瓶 |
产品推荐
货号 | CAS号 | 编号 | 包装 | 参数 | 库存 | 补货期 | 价格 |
BK2021081042 | CAS | BK2021081042 | 100 | 0 |
一、概述
Magarose-DEAE是一种弱阴离子交换磁珠,具有快速的磁响应性、丰富的离子交换能力和极高蛋白结合能力。离子交换配基为二乙氨乙基(diethylaminoethyl,DEAE),该配基在pH 3-12的工作范围内仍然能够保持稳定的高蛋白结合能力。Magarose-DEAE磁珠无需对粗蛋白样品进行预处理(如:反复繁琐的离心,费时费力的过滤操作),此外,无需控制流速及柱压,不需要昂贵的层析设备。对熟练的操作者,在短时间内就能完成高纯度目的蛋白的提取,且能轻松实现多个样品的平行处理,实现高通量的蛋白纯化。
二、产品特性
产品名称 |
Magarose-DEAE |
货号 |
PMAG006 |
磁珠浓度 |
25%(v/v)in 20%乙醇 |
总离子能力 |
110~170 μmol /ml磁珠 |
介质 |
6%交联磁性琼脂糖 |
粒径 |
20-45μm |
配体结合 |
~110 mg BSA /ml磁珠 |
保存 |
2~8℃保存一年 |
三、使用方法
1.产品优势
w 磁响应速度快,减少操作时间;
w 磁珠具良好分散性和重悬性,提高操作的便捷性;
w 配基具有良好的物理化学稳定性,提高了实验结果的可靠性及可重复性;
2.操作流程(以纯化含BSA蛋白样品为例)
1) 磁珠预处理(平衡):将磁珠漩涡振荡30 s,充分重悬;取一定量的25 %(v/v)磁珠悬液置于50 mL离心管中。磁分离,弃上清液,加入20 mL 平衡缓冲液洗涤磁珠3次,每次垂直混合2 min。
注:为获得目标蛋白的最大回收率,实验者需加入过量磁珠,一般大于蛋白结合量的20%即可。对于含较低丰度目标蛋白的样品中,磁珠对目标蛋白的回收率会有所降低,因此要继续增大磁珠的用量;
2) 蛋白吸附:将预处理的磁珠加入含BSA蛋白的样品溶液中,漩涡振荡30 s,置于垂直混合仪混匀30~60 min,使样品和磁珠充分接触并吸附,然后进行磁分离,移弃上清液。
注:为更有效的吸附结合物质,平衡缓冲液最好含较低离子强度,选择pH值应至少与目标蛋白等电点相差一个pH单位,选定盐缓冲液pH波动在0.5 pH以内。目标蛋白与磁珠吸附时间与蛋白本身属性有关。
3) 磁珠洗涤:加入20 mL的平衡缓冲液,漩涡振荡重悬磁珠30 s后磁分离,移弃上清;该操作重复3次。
4) 蛋白洗脱:在上述完成磁珠洗涤的离心管中加入适量洗脱液进行蛋白洗脱。迅速重悬磁珠,然后将离心管置于垂直混合仪混匀10~15 min后磁性分离,收集上清液至新的离心管中。洗脱方式主要有高盐浓度洗脱(含1-2 M的NaCl的平衡缓冲液)和低pH洗脱(选择低于目标蛋白等电点的pH范围即可)两种。
5) 磁珠再生:一般用2 M NaCl溶液洗涤3~5次,然后用平衡缓冲液进行再平衡。磁珠多次使用后有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上,为保证磁珠使用效率,建议在位清洗(CIP)。
6) 在位清洗(CIP):依次采用 1.0 M NaOH、70%乙醇或30%异丙醇、纯水洗涤磁珠2次;最后加入20%乙醇重悬磁珠,置于2~8℃保存。
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