苏州北科纳米科技有限公司
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  • 所 在 地:江苏省 苏州市
  • 主营产品: mxene 核酸提取磁珠 水凝胶/气凝胶 高熵材料 核酸提取仪 纳米酶 二维材料硅铋硼 钙钛矿 核酸提取试剂盒
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GST融合蛋白纯化用琼脂糖磁珠GST标签蛋白纯化磁珠GSH磁珠pull down

价格 1500.00/瓶
起订量 ≥1
所在地 江苏 苏州 可售量 10000瓶

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基本参数

品牌 北科纳米 型号 齐全
加工定制 产地 江苏
公差 0.01 制作工艺 熔接
形状 条形 表面处理 电镀
适用范围 电镀


货号 CAS号 编号 包装 参数 库存 补货期 价格
BK2021081044 CAS BK2021081044 100 0

一、概述

GST融合蛋白纯化磁珠(Magarose-GSH)具有高效、快速、方便等特点,是公司针对纯化 GST 标签融合蛋白而研制的一种新型纯化介质,可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步获得高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行 GST 融合蛋白的纯化。使用Magarose-GSH磁珠进行 GST Pull-down 实验,操作简单、快捷,具有传统方法无可比拟的优势。


二、产品特性

产品名称

Magarose-GSH

货号

PMAG002

磁珠浓度

25%v/vin 20%乙醇

配基及密度

20-30 umol GSH/ml磁珠

介质

6%交联磁性琼脂糖

粒径

20-45μm

配体结合

6-10 mg GST融合蛋白/ml磁珠

保存

2~8℃保存一年



三、使用方法

1.GST标签蛋白纯化

结合/洗杂液:140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH 7.4;

洗脱液:50 mM Tris-HCl,50 mM 还原型谷胱甘肽,pH 8.0; 洗脱液配制方法:0.1 M Tris 溶液 50 mL,1.535 g还原型谷胱甘肽,然后用 0.1 M 盐酸调 pH到 8.0,加去离子水至 100 mL。


磁珠使用量由用户根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得,这里仅以获得 5-10 mg 目标蛋白为例:

1.1磁珠准备:将GST纯化磁珠充分混匀,使用移液器取4 ml的磁珠悬浮液(磁珠体积为1 ml)置于离心管中,将离心管置于磁分离器上,待溶液澄清后,用移弃清液,加入去离子水反复清洗去除酒精。

1.2磁珠平衡:加入与悬浮液等体积的结合/洗杂液,用枪头反复吹打5次,将离心管置于磁分离器上,待溶液澄清后,移弃清液,重复洗2次。

1.3磁珠与蛋白结合:将GST融合蛋白裂解液加入到处理好的磁珠中,颠倒混匀,室温孵育30 min(如果目标蛋白不稳定,建议置于2-8 ℃下孵育1 h)。

1.4磁珠洗杂:置离心管于磁分离器,待溶液变澄清后,移上清液至新离心管,保留以备检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的结合/洗杂液,使用枪头反复吹打5次,置离心管于磁分离器,待溶液澄清,移上清液至新离心管,保留以备检测。重复洗杂步骤2次。

1.5洗脱:加入与悬浮液等体积的洗脱液,用移液器吹打5次,室温下孵育5-10 min,置于磁分离器上,待溶液澄清后,吸取上清液,即为目的蛋白组分。重复上述步骤多次,分别收集洗脱组分并留样检测,以提高目的蛋白的回收量。

1.6SDS-PAGE检测:将纯化所得样品用SDS-PAGE 检测。

注意:1. 谷胱甘肽现用现配。

2. 不同的 GST 融合蛋白与磁珠结合强弱程度不同,对大部分 GST 融合蛋白,使用含10mM 还原性谷胱甘肽的洗脱液即可洗脱目标蛋白;对少数结合能力较强的GST融合蛋白,可适当延长洗脱时间,增加洗脱次数,或提高洗脱液中还原型谷胱甘肽的浓度;

3. 结合/洗杂液和洗脱液中可添加1~5mM EDTA、1~10mM DTT、0.1~1.0%Triton X-100、0.1~1.0%Tween 20等。


1.7 磁珠清洗和保存:磁珠使用后经过简单清洗处理后,可以继续用于后续的纯化操作,也可长时间保存。用户可根据磁珠使用情况选择清洗方法,主要有:

情况1:重复使用次数较少,结合能力下降不明显时,可采用高pH和低pH Buffer交替洗涤的方式进行清洗:

w 高pH洗(碱洗):使用后的磁珠加入10 mL 清洗液A(0.1 M Tris-HCl,0.5 M NaCl,pH 8.5),漩涡振荡60 s,磁性分离,去除上清液;

w 低pH洗(酸洗):加入10 mL 清洗液B(0.1 M 醋酸钠,0.5 M NaCl,pH 4.5),漩涡振荡60 s,磁性分离,去除上清液;

w 重复碱洗、酸洗交替清洗2次,共3次。

情况2重复使用次数较多时,由于沉淀、变性或非特异性吸附蛋白积累,导致磁珠结合目标蛋白的能力明显下降。去除沉淀或变性蛋白,可按下面的方法进行洗涤:

w 先用5 mL 6 M盐酸胍洗涤2次,每次漩涡振荡60 s,磁性分离,去除上清液;

w 再用10 mL 1X PBS洗涤3次,每次漩涡振荡60 s,磁性分离,去除上清液。


情况3去除疏水性结合物质,可按下面方法进行洗涤:

w 先用5 mL 70%乙醇或0.1%的非离子型表面活性剂洗3次,每次漩涡60 s,磁分离,去除上清液;

w 再用10 mL 1X PBS洗涤3次,每次漩涡振荡60 s,磁分离,去除上清液。


注意:完成情况1或2的清洗后,如用户需继续使用磁珠纯化蛋白,需先用结合/洗杂液洗2~3次。如不需继续使用,则用20%乙醇洗磁珠2~3次后,再加入20%(v/v)乙醇到磁珠中使总体积为4 mL,保存于2~8°C。


2Pull-Down操作流程

结合/洗杂Buffer:140mM NaCl, 2.7mM KCl, 10mM Na2HPO4, 1.8mM KH2PO4, pH7.4

洗脱Buffer:50 mM Tris-HCl, 10 mM 还原型谷胱甘肽, pH 8.0


1)磁珠准备:取适量GST纯化磁珠(磁珠体积为总体积的10%),将磁珠反复颠倒,充分混匀,使用移液器取适量的磁珠悬浮液,置于离心管中,将离心管置于磁分离器,待溶液澄清后,吸弃清液。

2) 磁珠平衡:从磁分离器上取下离心管,加入与悬浮液等体积的结合液,反复吹打5-10次,置离心管于磁分离器上,待溶液澄清后,吸弃清液,重复洗涤2次。

3) 磁珠结合靶蛋白:将含GST 标签的靶蛋白样品加入到处理好的磁珠中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温孵育30 min。

4) 磁珠洗杂:将离心管置于磁分离器,待溶液澄清后,移出上清液,保留以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的洗杂液,反复吹打5-10次,置离心管于磁分离器上,待溶液变澄清后,吸弃上清液,重复上述步骤2次,即得靶蛋白-磁珠复合物。

5) 目标蛋白与靶蛋白-磁珠复合物的结合:将含有目标蛋白样品加入到处理好的靶蛋白-磁珠复合物中,颠倒混匀。将离心管置于混合仪上,室温孵育30 min。

6) 磁珠洗杂:将离心管置于磁分离器,待溶液澄清后,移出上清液,保留以备取样检测。向离心管中加入2倍悬浮液体积的洗杂液,反复吹打5-10次,将离心管置于磁分离器上,待溶液变澄清后,吸弃上清液。重复上述步骤2次。目标蛋白通过与靶蛋白的结合,从混合体系中被捕获。

7) 目的蛋白的洗脱:在上述离心管中加入与悬浮液等体积的洗脱液,用移液器吹打5次, 然后在室温下置于翻转混合仪或者手动轻轻翻转离心管,5-10 min后,置于磁分离器上,待溶液变澄清后,吸取上清液,收集洗脱组分,即得到靶蛋白和目标蛋白复合物。也可以再重复操作一次,分别收集洗脱组分,留待检测。


3.注意事项

1) 磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作;

2) 使用本产品前,请务必充分振荡使磁珠保持均匀的悬浮状态;

3) 磁珠与溶液混合过程中,如果溶液粘稠无法通过翻转离心管重悬磁珠,可采用移液器反复吹吸或短时漩涡混合使磁珠充分重悬;

4) 用户可根据实际需要保留经磁性分离移去的上清液,进行取样检测,以便分析纯化过程和优化蛋白纯化流程;

5) 本产品可重复使用,重复使用时,建议纯化同种蛋白,纯化不同种类的蛋白时,建议使用新的磁珠,以防交叉污染;

6) 本产品需与磁性分离器配套使用;

本试剂盒只能够用于体外实验,不能够用于临床、治疗和动物体内实验等,由此产生的后果概不承担责任。


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