粪便核酸提取试剂盒
价格 | ¥2580.00/盒 | |
起订量 | ≥1 | |
所在地 | 江苏 苏州 | 可售量 10000盒 |
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货号 | CAS号 | 编号 | 包装 | 参数 | 库存 | 补货期 | 价格 |
BK2021062313 | N/A | BK2021062313 | 盒 | 100 rxns | 100 | 2580 |
01/产品介绍
本试剂盒基于硅基磁珠特异性吸附DNA的原理,化学法和酶解法联合释放粪便基因组,搭配特殊研制的缓冲体系,高效除去多糖类、脂类、酸类、消化酶类及胆红素等杂质,可从0.25-5g体积的粪便样本中稳定提取基因组DNA分子,获得的基因组DNA适用于常规PCR反应、qPCR反应、酶切反应及检测等下游实验。
02/产品优势
无需酚或氯仿等有毒试剂
兼容手动及高通量操作
操作简便快捷,质量稳定
03/产品内容
04/保存条件
室温保存1年有效。
05/自备试剂
异丙醇,无水乙醇
06/注意事项
初次使用前,请向Buffer FW2和Buffer FW3中加入相应体积的无水乙醇。
每次使用前摇匀各瓶中溶液,使体系均一,保证提取效果。
溶液放置一段时间后若产生沉淀(如Buffer KE和Buffer KEG),可37℃水浴溶解,不影响效果。
使用无菌离心管和枪头,避免外源核酸酶污染。
如果单次粪便提取量大于0.5g,可按比例扩大体系加入量和洗脱量即可。
07/使用方法
1.取0.25-0.5g粪便于2ml洁净离心管中。
2.向其中加入500ul Buffer KE和20ulProteinase K,漩涡混匀30s。
3. 68℃孵育(水浴和金属浴均可)10min,每间隔2-3min漩涡混匀5s。
4. 12000rpm或13400g,室温离心3min,转移上清液于1.5ml离心管中,加300ulBuffer KEG
和200ul异丙醇及20ul磁珠悬液(注意:加入前漩涡混匀磁珠悬液)。
5.漩涡混匀30smin,静置1min。
6.重复操作步骤5两次。
7.转移离心管置于磁力架上,进行磁分离后,小心吸去液体(注意:不要吸走磁珠)。
8.从磁力架上取下离心管,加入800ulBuffer FW1,漩涡混匀30s,室温静置1min,进行磁分离,吸去除磁珠以外的液体(注意:不要吸走磁珠)。
9.从磁力架上取下离心管,加入800ulBuffer FW2,漩涡混匀30s,室温静置1min,进行磁分离,吸去除磁珠以外的液体(注意:不要吸走磁珠)。
10.从磁力架上取下离心管,加入800ulBuffer FW3,漩涡混匀30s,室温静置1min,进行磁分离,吸去除磁珠以外的液体(注意:不要吸走磁珠)。
11.重复操作步骤10一次。
12.转移离心管于磁力架上,室温晾干8-10min(注意:晾干时间不可超过10分钟,否则会影响基因组质量)。
13.取下离心管,加入50-150ulBuffer FTE,漩涡混匀30s或用移液枪吹吸混匀20次,65℃孵育8min,期间漩涡混匀5s或吹吸混匀2次。
14.转移离心管置于磁力架上,进行磁分离,转移除磁珠以外的液体于新的离心管中,-20℃保存。
08/常见问题及应对策略
◆获得的基因组DNA纯度低
1.建议增加Buffer FW1和Buffer FW2洗脱用量100ul。
2.选用新鲜粪便样本进行提取。
3.洗涤过程中,磁珠未被充分打散,有蛋白聚集,建议增加吹吸或漩涡混匀的力度和时间或异丙醇用量由200ul减至100ul。
4.提取样品量不合适,可适当放大或减少
5.用BufferFTE洗脱前未充分晾干,有少量乙醇残留。
◆获得的基因组DNA浓度低
1.建议更换新鲜的样本进行提取。
2.减少BufferFTE的用量,或延长65℃孵育时间至15min。
3.洗脱过程中,磁珠未充分磁分离就转移液体,造成磁珠损失。
4.加大磁珠5ul,以增加吸附力度,从而增大得率。
5.晾干时间超过10分钟,磁珠太过于干燥,洗脱效率下降。
6.用Buffer TE洗脱过程中未充分打散磁珠团块,造成基因组释放不充分。
◆提取过程中出现磁珠结团现象
在磁珠法提取过程中,由于大量染色质核酸吸附在磁珠表面,绝大多数情况下会出现磁珠结团的现象。此现象可作为核酸含量的判别指标,一般来说,有结团说明样本良好,吸附过程顺利高效,只要操作者在洗涤和洗脱过程中,充分打散团块就可得到理想的基因组DNA分子。
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