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伊势久生物试剂 抗坏血酸氧化酶(AAO)试剂盒 科研用

价格 130/瓶
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基本参数

纯度 / 规格 KE003-48T
品牌 伊势久生物 产品名称 抗坏血酸氧化酶(AAO)试剂盒
名称 抗坏血酸氧化酶(AAO)试剂盒 包装
性状 液体 用途 生化研究
储存 4℃ 产品规格 48T

DSCF2954-KE003-48T-组合.JPGDSCF2951 -KE003-48T-2.JPGDSCF2950 -KE003-48T-1.jpgDSCF2951 -KE003-48T-2.jpgDSCF2953 -KE003-48T-3.jpg

抗坏血酸氧化酶(AAO)试剂盒

产品简介:

AAO 是定位于植物细胞壁的糖蛋白,属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和 AAO 与细胞壁代谢和生长有着密切的联系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通过质膜上的细胞色素 b 还原,该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。 AAO 可直接氧化 AsA,通过测定 AsA 的氧化量,可计算得 AAO 活力。

实验中所需仪器及设备:

低温离心机、紫外分光光度计、1ml 石英比色皿、可调式移液器、研钵、冰、蒸馏水。

组成:

产品名称

KE003-48T

Storage

试剂

60ml

4℃

试剂二

50ml

4℃

试剂三

粉剂×1

4℃

临用前加入10ml蒸馏水充分溶解。

说明书

一份

操作步骤(仅供参考):

一、粗酶液提取:

按照组织质量g:试剂一体积(ml)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一)进行冰浴匀浆。16000g4℃离心10min,取上清置冰上待测。

二、AAO测定操作:

1.分光光度计预热30min,调节波长到265nm

2.试剂二在25℃水浴锅中预热30min

3.空白管:依次在1ml石英比色皿中加入100μl蒸馏水、850μl预热的试剂二和50μl试剂三,迅速混匀后在265nm测定10s130s光吸收A1A2,△A空白管=A1-A2

测定管:依次在1ml石英比色皿中加入100μl上清液、850μl预热的试剂二和50μl试剂三,迅速混匀后在265nm测定10s130s光吸收A3A4,△A测定管=A3-A4

三、AAO活性计算:

1)按蛋白浓度计算AAO活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmolAsA1UAAO(U/mgprot)=(A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(Cpr×V)÷T=0.0924×(A测定管-A空白管)÷Cpr2)按样本质量计算AAO活性单位定义:25℃中每毫克样本每分钟氧化1μmolAsA1UAAO(U/g)=(A测定管-A空白管)÷(ε×d)×V反总×106÷(W×V样÷V样总)÷T=0.0924×(A测定管-A空白管)÷Wε:AsA265nm处摩尔吸光系数为5.42×104L/mol/cmd:比色皿光径(cm),1cmV反总:反应体系总体(L),1000μl=1×10-3L1061mol=1×106μmolCpr:上清液蛋白质浓度(mg/ml),需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒;V样:加入反应体系中上清液体(ml),100μl=0.1mlV样总:加入提取液体,1mlW,样本质量,gT:催化反应时间(min),2min

注意事项:

1本产品仅供科研使用,严禁它用。

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