生物试剂 RIPA裂解液(中)
| 价格 | ￥440.00/瓶 | |
| 起订量 | ≥1 | |
| 所在地 | 上海 上海 | 可售量 10000瓶 |
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上海跃腾生物技术有限公司
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RIPA裂解液(中)
产品简介：
多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等。RIPA裂解液（中）(RIPA Lysis Buffer)是采用一种经典的细胞组织快速裂解并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)。所获得的蛋白质可用于Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)等。
Medium RIPA Lysis Buffer主要由Tris 、NP-40、sodium deoxycholate等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。 。
组成：
产品名称
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PC006-100ml
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PC006-500ml
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Storage
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RIPA裂解液(中)
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100ml
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500ml
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-20℃
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说明书
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一份
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储存条件：
-20℃，12个月有效。
操作步骤（仅供参考）：
(一)贴壁培养细胞
1、取Medium RIPA Lysis Buffer置室温溶解混匀，使PMSF终浓度为1mM。 2、 去除贴壁细胞的培养液，低速离心，弃上清。 3、 按照6孔板每孔加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Medium RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解15～30min，通常裂解液作用于细胞1～3秒内，细胞就会被裂解。 4、 4℃离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。 5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)悬浮培养细胞
1、取Medium RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM。 2、 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。 3、 用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入150～250μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Medium RIPA Lysis Buffer 。 4、 10000～12000g，4℃离心5～10min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。 5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)组织样本
1、取Medium RIPA Lysis Buffer 置室温溶解混匀，使PMSF终浓度为1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在之内，以减少蛋白的降解。
4、按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解。
5、步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150～250μl裂解液的比例，加入含有PMSF的Medium RIPA Lysis Buffer。
6、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。 7、 进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1、去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以丌用清洗。
2、如果裂解丌充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
3、如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/离心管，然后再裂解。
4、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。
5、溶解Leagene RIPA Lysis Buffer时，应尽量缩短溶解时间，避免有效成分失效。
6、裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。
7、本产品仅供科研使用，严禁它用。
上海跃腾生物技术有限公司
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